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减毒重组技术及其在登革热疫苗研发中的应用 舒俭德 法国赛诺菲一巴斯德公司医学总监 结构基因，其编码的蛋白在病毒复制过程中起重要作 1．减毒活疫苗(LAVs)是指含有毒力降低的(或减 毒的)活病原体，能够诱导机体产生免疫应答而不引 用。 起疾病的疫苗。 为了对抗黄病毒，需要产生一种针对E蛋白的特异 研发减毒活疫苗的最大挑战在于要找到一个既有 的免疫应答，该种蛋白与病毒的吸附、穿入等作用密 较高的免疫原性(保护作用)又有很好的安全性(不 切相关。黄病毒属中E蛋白的不同决定了病毒穿入细胞 引起疾病)的平衡点。 的过程及致病作用的不同。 传统的实验室减毒技术是以在细胞中连续传代培 嵌合病毒疫苗技术是运用重组技术来进行减毒的 养为基础的，新兴的减毒技术则运用了分子生物学技 一个工艺平台。该技术是用其他黄病毒的基因(膜蛋 术(基因重组技术)来对病毒进行减毒。减毒后的毒 白和包膜蛋白)来替换黄热病毒17D株的相应基因。黄 株与野毒株在遗传学上存在差异，这种基因上的差异 热病毒(17D株)被认为是该属病毒的原病毒(种病 正是减毒的原因。 毒)。最终，黄病毒属的减毒活疫苗包含了黄热病疫 与传统的减毒活疫苗减毒后病原体分子基础不详 苗株中负责复制的基因以及各种黄病毒的膜蛋白和包 不同，重组后的减毒活疫苗的病原体基因组的变化易 膜蛋白。 于识别并得到良好的控制。 4．迄今为止，赛诺菲巴斯德已经致力于登革热疫 2．黄热病毒(YF)、乙型脑炎(JE)和登革热都是黄病苗的研发超过20年。研发的主要难点在于要研发出一 毒属家族成员，并且均通过虫媒传播。 种同时对四种登革热野毒株均安全、有效的疫苗。很 黄热病疫苗和乙型脑炎疫苗都是传统的减毒活疫 遗憾，在过去的几十年中，第一代传统的减毒疫苗 苗，至今已经累计接种数亿剂。广泛的使用已经证实 (部分仍处于研发过程中)无法同时、持续满足安全 这两种疫苗在遗传学上均很稳定，至今没有发现因疫 性与有效性的要求，这也正是到目前为止仍然没有一 苗株毒力回复而致病的病例报告。 种登革热疫苗上市的原因。 目前尚未发现自然界中黄病毒之间(如登革热 自上世纪90年代巴斯德开始研发四价登革热疫 病毒与乙型脑炎之间)存在基因间(不同种类)的重 苗，用于同时预防四种病毒。其中，最好的候选疫苗 组。过去几十年上亿剂次的使用经验表明，尚没有黄 已于2000年开始进行临床研究。 ． 热病疫苗株或乙型脑炎疫苗株与其他黄热病属的野病 2010年lO月，该登革热疫苗进入了IIl期临床研 毒重组的病例报告。 究。它是第一个进入研发最后阶段的登革候选疫苗。 科学研究表明，将登革热病毒野毒髁与荑熟病病 该候选登革热疫苗已经在美国、亚洲和拉丁美 毒野毒株人工重组，毒力与其原病毒相比有了极大的 洲的成人和儿童中进行了I期、II期临床评估。总体而 降低。重组后的病毒不会引起疾病及疾病的传播，在 言，接种三剂之后，四种血清型均达到了良好的免疫 体外培养、虫媒携带以及包含猴在内的易感动物模型 应答，每剂之后均表现出相似的安全性。 中的研究均得出相同的结论。这种减毒株不会通过虫 该登革热疫苗的研发项目包括正在墨西哥、哥伦 媒传播。 比亚、洪都拉斯、波多黎各、秘鲁、巴西、菲律宾、