食管鳞状细胞癌中Beclin1表达及其对增殖的影响.pdfVIP

临床与实验病理学杂志 JClinExpPathol 2013Jul；29(7) ·745 · 食管鳞状细胞癌中Beclinl表达及其对增殖的影响 吴 娟 ，杜 芸 摘要：目的 探讨Beelinl在食管鳞状细胞癌 (esophagussquamouscellcarcinoma，ESCC)中的表达及意义 ，分析其过表达对人 ESCC细胞株TEl体外生长活性的影响。方法 分别采用免疫组化 sP法和RT—PCR技术检测57例ESCC及癌旁正常食管黏 膜组织中Beclinl蛋白及mRNA的表达 ；利用基因转染、RT—PCR及Westernblot法观察外源性 Beclinl过表达对ESCC细胞株 TEl的影响；MTT法分析外源性Beclinl过表达对TEl细胞增殖的影响；流式细胞仪 (flowcytometry，FCM)检测转染后肿瘤细 胞的细胞周期和凋亡；在荧光显微镜下观察转染后肿瘤细胞的自噬。结果 免疫组化染色结果示，在ESCC中Beclinl蛋白的 阳性率为29．82％(17／57)，明显低于癌旁正常食管黏膜组织 100％(57／57)(P0．00)，Beclinl蛋白的表达与ESCC患者的分 化程度 (X=6．158，P=0．046)、淋巴结转移 (X=5．664，P=0．017)有关；与患者性别、年龄、肿瘤大小、浸润深度无关；RT— PCR检测结果示 ，在ESCC中BeclinlmRNA的表达量 (0．168±0．038)明显低于癌旁正常食管黏膜组织 (0．280±0．052)(P 0．00)。pCMV6．Entry．Beclinl脂质体法转染TEl细胞后 ，在 mRNA和蛋白水平Beclinl的表达均高于TEl 组及TEl组。在 TEl细胞中过表达 Beclinl后可抑制肿瘤细胞的体外生长 ，抑制率为57．21％。FCM检测pCMV6一Entry—Beclinl转染后G 期细 胞明显增多，s期细胞明显减少，细胞增殖受到抑制；凋亡率为5．91％，高于TEl 组和TEl组 (P0．05)。在荧光显微镜下见 TEl 组中MDC标记的自噬囊泡数量明显增加。结论 自噬相关基因BeclinlmRNA及蛋白在 ESCC中表达下调，自噬活 性的降低可能与ESCC的发生 、发展及侵袭转移有关；Beclinl过表达可抑制人ESCC细胞株 TEl的增殖，并诱导其 自噬和凋 亡，利用 自噬基因Beclinl对ESCC基因治疗也许具有可行性。 关键词：食管鳞状细胞肿瘤；Beclinl；自噬；凋亡；TEl细胞 中图分类号：R735．1 文献标志码：A 文章编号：1001—7399(2013)07—0745—06 ExpressionofBeclinlin esophagealsquamouscellcarcinomaand effecton proliferation of TE1cell Wu Juan．DU Yun (DepartmentofCancerDetectionCenter，theFouthHospitalofHebeiMedicalUniversity，Shijiazhuang 050011，China) Abstract：Purpose ToinvestigatetheexpressionandsignificanceofautophagyrelategeneBeclinlinesophagussquamouscellcarci- noma(ESCC)andtoanalyzestheeffectofitsover—expressiononthegrowthofhumanesophaguscarcinomacellTElinvitro．Methods ImmunohistochemicalstainingandRT—PCRwereusedtodetecttheproteinandmRNA expressionsofBeclinlin57specimensESCC andnormalesophagealmucosatissues．Geneover—expression．RT—PCRandWesternblotwereusedtoinvestigatetheinfluenceofexog— enousBeclinlonESCCTElcells．MTTassaywasusedtoevaluatetheeffectofBeclinlover—expressionontheproliferationandgrowth oft