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脂质体色谱及其在中药活性成分分析中的 应用 张海鸣，赵小亮，闫寒，聂颖兰，彭娟，孙健，范斌P (中国中医科学院医学实验中心，北京100700) 摘要本文介绍了固定化脂质体与脂质体电动色谱技术近十几年的发展状况、着重介绍其用于药物与膜 相互作用研究的原理及研究成果，并探讨了该技术在中药活性成分筛选和活性评价领域的应用前景。 关键词脂质体色谱中药活性成分相互作用 药物的吸收、分布、代谢及排泄等都涉及到跨生物膜的转运。药物要发挥疗效，其在 生物膜中的通透性是一个不可忽视的重要因素，药物与生物膜的相互作用反映了药物的膜 通透性。新药研发初期人们通过测定药物在有机溶剂-水系统(如辛醇-水)及反相液相色 谱系统(如以十八烷基硅胶为固定相)中的分配系数或者以单层小肠绒毛细胞及小鼠的小 肠为模型来考察药物的被动吸收情况川。但这些模型不能准确模拟药物与生物膜的相互作 用，因而迫切地需要类生物膜结构的评价系统，一种快速、便捷、全新的膜通透性色谱评 价模型应运而生，即生物膜色谱。生物膜色谱是指在色谱系统中引入类生物膜结构(脂质 体、磷脂单分子层、微乳或胶束等)，同时类生物膜结构作为分离过程中的主要活性组成来 决定药物保留，药物保留反映了药物与生物膜的作用强度，通常使用的色谱系统有液相色 谱和毛细管电泳。生物膜色谱一般按引入色谱系统中类生物膜结构来分类，包括生物分配 脂质体色谱、磷脂膜色谱、生物分配胶束色谱和生物分配微乳色谱。近十几年来，这些技 术已经在多肽及蛋白与脂双层的相互作用12-3]、溶质与蛋白的相互作用”4j、蛋白的纯 化[6】、 核酸的分离纯化【71、异构体拆分[8】、生物膜亲和色谱【9|、药物与细胞膜的相互作用 ¨训等领域得到了广泛的应用。 中药是一个复杂体系，一种中药往往含有结构、性质不尽相同的多种成分，不同性质 的成分数量多、结构差异大、含量差异显著，复方的情况更加复杂，这势必使中药的药效 物质基础的研究十分困难。中药复杂体系中各类成分的生物膜通透性是药物活性筛选和研 究的前提和关键步骤之一，有助于揭示其药效物质基础，为中药药效物质基础的研究提供 了一条新的思路。脂质体被视为最接近天然生物膜的简单理想的模型，现将脂质体色谱在 中药活性成分分析中的应用做一综述，旨在为将生物膜色谱技术应用于中药活性成分的分 析提供依据。 胞膜相似的脂质双层结构和生物膜的流动性特征…】。这种人工模拟的生物膜体系不仅可以 精确地模拟生物膜的化学环境，而且其物理性能也可以通过调节温度、pH、离子等得到有 效控制。脂质体以毒性低、制备简单、可使药物包裹入脂质双分子层，避免药物的降解， 可实现药物靶向给药等特点，而被广泛作为药物载体使用【l21。目前，以脂质体模拟生物膜 的体外模型有固定化脂质体色谱和脂质体电动色谱。 1固定化脂质体色谱 基金项目：中国中医科学院医学实验中心自主课题资助项目(ZZ2012009) 第一作者简介：张海鸣(1984一)，女，博士，研究方向：中药有效成分的分析、体内分析及中药化学研究。E-maih halmm903(a)，sma．com ·通讯榨者简介：范斌(19斛一)，男，中国中医科学院医学实验中心物质分析检测实验室主任，研究方向：中药有效成分的分 析、体内分析及中药化学研究。E-mail：binf@263．net 43l 固定化脂质体色谱(ILC)是一种新颖的筛选经被动吸收药物的技术，脂质体可通过 静电作用、疏水性结合、空间作用、抗生物素蛋白一生物素亲和结合或共价作用连接在凝胶 颗粒上成为固定脂质体色谱的固定相。固定化脂质体色谱主要用于溶质与脂质体膜的相互 作用研究，溶质由流动相扩散进入脂质体膜后得到保留，由此可计算出其在流动相和膜中 的分配系数。已知各种药物分子在脂质体膜上的保留便可推测药物分子在体内通过细胞膜 的吸收和传递过程【l2|。Beigitl3J首次采用凝胶为载体，利用固定化的脂质体作为固定相用于 模拟小肠上皮细胞对药物的被动吸收过程。研究表明药物在该模型上的保留性能与传统的 检测药物活性的小肠吸收模型有很好的相关性。凝胶作为载体有许多优点，生物相容性好， 孔径大可容纳大泡脂质体等，但却不能负载较大的柱压，比表面积小，不易于保存，磷脂 固载量低等。随后，邹汉法等【14】对这一方法进行了改进，利用涂敷磷腊的硅胶为模拟生物 膜色谱固定相，预测药物的小肠吸收。涂敷磷脂的硅胶固定相依赖溶胀形成的脂质体的外 表面的