中性植酸酶在水产养殖中应用及其基因工程研究进展.pdfVIP

中性檀酸酶在水产养殖中的座厕 及其基国重程研窕进展 付石军，孙建义，陈艳 (浙江大学饲料科学研究所，杭州 310029) 摘要：植酸酶作为一种生物型饲料添加剂，它对提高饲料中磷的利用率、动物的生产性能 以及减轻因动物高磷粪便所导致的环境水污染有重要意义。来源于芽孢杆菌的植酸酶是一类 中性植酸酶，具有良好的热稳定性，其稳定性和活性对钙离子具有较强的依赖性，酶促反应 的pH有效作用范围在7．0—7．5之间，主要应用于消化道无胃、肠道pH呈中性的淡水鲤科鱼 类饲料。本文综述了芽孢杆菌植酸酶的酶学性质、在水产养殖中的应用、分子生物学特征及 其基因工程研究进展，并对其研究前景作了展望。 关键词：芽孢杆菌；中性植酸酶；水产养殖；分子生物学；基因工程 随着饲料工业和养殖业的迅猛发展，饲料中未被消化利用的植酸磷对环境污染日益严重，能降解 植酸磷的植酸酶(Ⅱ驴．i1108i“．hexaphosphale 点。以往植酸酶的研究主要集中在酸性植酸酶上，酸性植酸酶适用于胃pH呈酸性的单胃动物以及少数 鱼类如虹鳟等，但不适用于消化道为中性的淡水鲤科鱼类和畜禽消化道中呈中性的部位。目前，对中 性植酸酶的分子生物学、编码基因的分离克隆及表达、中性植酸酶在生产上的应用等方面还缺乏较深 入的研究。 来源于芽孢杆菌的植酸酶属于中性檀酸酶，不仅具有较好的热稳定性，有助于抵抗饲料制粒过程 中高温引起的酶失活，而且其酶促反应的pH值有效作用范围在7．0—7．5之间，可以有效弥补酸性植 (Bacillus sp)等(见表1)。 芽孢杆菌中性植酸酶的酶学特性 1．1一般酶学性质 kDa)和等电点( 各种芽孢杆菌植酸酶的酶学性质基本一致，具有相近的分子量(38～47 315 酶制剂器勰烈襞糕稀丽丽丽矿—————————————一 6．5)，都具有较高的热稳定性，最适pH值在7．0左右(见表1)。 表1中性植酸酶的一般酶学性质 来源 分子量(kDa) 最适pH 最适温度(℃) 等电点 B．subtilisVIFE-68013 43 7．0 55 6．5 B．subt／／／sⅣ_77 38 6．25 60 6．25 B．sel／Jtiliw】68 44 7．0 55 5．0 B 7．0 65 5．1 liehenifo．r盘47 墅竺些翌：丝!! 竺 !：! 塑 i：1 1．2中性植酸酶的热稳定性 芽孢杆菌中性植酸酶具有比来源于真菌和大肠杆菌的酸性植酸酶更好的热稳定性。Kim等(1998) 化芽孢杆菌植酸酶在90℃处理10 nmaol／L 保温10min仍保留酶活20％。 1．3中性植酸酶对钙离子的依赖性 芽孢杆菌中性植酸酶对Ca2+具有较强的依赖性。首先，植酸酶酶活可被诸如EDTA等螫合剂抑制， 引起酶抑制的原因可能是从酶中移除了Ca2+，当加入ca2+时，酶蛋白可明显地重现活性，而加入其他 金属离子不能或者只能部分替代ca2+而形成有活性的酶；其次，植酸酶的全酶、脱辅基酶和钙重新激 活酶的圆二色光谱(cD光谱)揭示了ca2+在蛋白构造中的局部作用。试验结果表明，培育在含有 ca2+的环境中，部分失活酶蛋白可重新折叠成具有活性的结构(Kerovuo等，2000)。 菌植酸酶的竞争性抑制剂，过量ca2+将预先占据活性位点从而抑制底物与活性位点的结合。