猪圆环病毒2型Cap蛋白间接ELISA诊断方法的建立和应用.pdfVIP

猪的传染病一猪圆环病毒病 防止再次发生继发感染。采取上述综合措施4d后，猪群无新发病例，病情得到了有效控制。 6讨论 通过对猪场进行流行病学调查，对病死猪的临床症状及剖检变化进行观察和实验室诊断，最终 诊断此次猪场发生的疾病为猪恻环病毒2型和副猪嗜血杆菌混合感染，并在采取了正确的综合防制 措施后，病情得到了有效控制。 此次发病是由于畜主引进猪后，在没有消除猪群应激的状态下急于注射疫苗，加强了猪群的应 激反应，并日．在发病后没有采取正确的治疗措施造成的。因此，作者建议猪，在从外地引进猪后应 首先采取措施消除猪群的应激，猪群稳定后再注射疫苗，并且2种疫苗的免疫间隔期应在10～15d， 以避免2种疫苗互相干扰。 对于猪圆环病毒2型，国内可选用的疫苗较少，因此，更应注意加强猪群饲养管理，并配合严 格的生物安全措施和消毒措施，必要时注射本场自制疫苗来控制此病。副猪嗜血杆菌是猪上呼吸道 的常在菌，能从健康动物的鼻腔、鼻分泌物、气管和扁桃体中分离到。副猪嗜血杆菌只感染猪，有 很强的宿主特异性。病菌寄居丁感染猪的呼吸道，在应激情况下各年龄猪群都易发病，饲养环境不 良，断奶、转群、混群或长途运输也是常见诱冈。疫曲．免疫和药物治疗对此病都是比较有效的防制 措施。副猪嗜血杆菌对生长条件要求比较苛刻，培养难度较大，凶此作者采用套式PCR方法诊断该 病，此法不仅可以大大缩短诊断时间，而且具有很高的灵敏度。 参考文献(略) 张志凌p闫若潜吴志明1谢彩华王东方王英华贾松涛 (河南省动物疫病预防控制中心，河南郑州450008) ELIsA诊断方法；对最适包被抗原浓度、待检血清稀释浓度、重组抗原包被条件、封闭液的筛选、阴阳性临界值等 条件进行了优化；对优化后的ELIsA检测方法进行特异性试验、，}占床应用实验；组装试剂盒并进行试剂盒保存期试 验。结果：优化反应条件后确定的抗原最适包被浓度为2．815“∥mL，抗原最佳包被时间为37℃2h：血清最适稀释 感染的100份血清样品进行检测，阳性检出率为69％。组装试剂盒在4℃至少可保存12个月以上，说明所建立的诊 断方法可以在生产中大量推广应用。本研究成功建立了能特异性检测抗Pcv2血清抗体的ELIsA检测方法。 关键词猪圆环病毒2型；cap蛋白；间接ELlsA；检测；应用；试剂盒 et 猪圆环病毒(Porcine a1．，1986)。 PCVl无致病性，但可存在于正常猪体各器官及猪源细胞中；PCV2有致病性，可引起母猪流产、仔 猪出现呼吸道症状及死亡、育肥猪生产性能下降等症状，是引发断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMwS) 和猪的皮炎与肾病综合征(PDNS)等有_关疾病的承要病原；PCv2还可引起猪体免疫抑制，造成猪 的疫苗免疫失败(Chae，2005)。PCV2与其他细菌病或病毒病混合感染后还町大大加剧猪的死亡率。 因此PCV2是当前公认的严重危害养猪业的雨要病毒性疾病之一。 2为 Cap蛋白上存在抗原表位，具有免疫原性，在两型PCV之间，不存在交叉免疫反应。因此ORF2基 ’河南省科技攻关项目(No．0624410098) P张志凌(19“一)，女，河南新乡人，研究员，研究方向：动物疫病防控技术研究 第十三次学术研讨会会议论文集 et 因成为建立PCV2特异性血清学检测方法及核酸疫苗研究的目的基因(Nawagitgula1．，2000)。为了 建立能特异性检测抗PCV2抗体的诊断方法，本研究以pQE30原核表达系统表达并纯化的重组 PCV2 cap(疋ap)蛋白为包被抗原，经优化条件建立了PCV2特异性的间接ELISA诊断方法。 1材料和方法 1．1 主要仪器和试剂 心机，购自Henich产品。pQE30原核表达系统表达并纯化的重组PCV2Cap(疋ap)蛋白由河南省 动物疫病预防控制中心构建并保存。PcV2阳性及阴性血清：购自北京世纪元亨公司。PCVl阳性血 清：