双色荧光示踪可移植性人脑胶质瘤干细胞模型的建立初步应用.pdfVIP

双色荧光示踪可移植性人脑胶质瘤干细胞 模型的建立与初步应用 黄强 苏州大学附属第二医院神经外科215004 其微生态环境需要而被征集米的宿土内皮饥细胞，小胶质／巨噬细胞，淋巴细胞等各种细胞。他们利川各臼分泌 不同冈子间相互作刖，组成网路式的相生相克关系。然而要鉴别哪些是肿瘤细胞嫡系，哪些是宿主细胞并：|E容易， 即使用各自所谓特异性标志蛋白的免疫组化，往往冈并非绝对特异而产生误判，或者两者在分子遗传学上的同源 性而无法鉴别。虽然单纯对肿瘤细胞转荧光蛋白基阗，在荧光镜下观察可以提高分辨率，但仍不如肿瘤细胞和宿 表达RFP／．GFP可移植性人脑胶质瘤干细胞模型，用丁分析肿瘤组织中与细胞起源相关的结构性变化。以克服目 前对肿瘤组织细胞起源识别的困难。 Cancer 方法(B～lC 裸小鼠脑内，腹腔和皮下，获得的移植瘤组织既表达RFP又表达GFP。5 光扫描激光共聚集焦显微镜下分析移植瘤细胞起源及相关结构。 三、结果l 培养早悬浮球状生长．在含血清条件下培养则星多形性贴壁生长；在体内，无论接种丁脑内、皮下，还是腹腔都 接近100％的致瘤率。SU3-RFP转染率经反复筛选后，90％以上的细胞稳定表达RFP。2 官和细胞无一例外，都表达GFP。3 224 舣翻I性的黄色细胞，以明显可辨的特征显示肿瘤干细胞有融合宿土细胞强人功能。4 冰冻组织切片，在荧光共聚焦显微镜卜观察剑RFP／GFP及其舣翔l性的二类细胞，在肿瘤组织中交织存在的复杂大 系。住流式细胞仪上能测定一二类细胞的比例。(3)根据肿瘤血管腔侧面细胞的形态平Il彦色，可判断组成肿瘤由．管 边缘的宿主细胞住肿瘤进展中的变化趋向．至少有一部分细胞不是冈肿瘤侵蚀而消火，而是冈被诱导成癌细胞而 参与肿瘤的恶性进展。 四、结论RFP／GFP舣色荧光示踪的可移植性人脑胶质瘤在荧光镜卜．清晰可辨其细胞起源和相且交织关系。可 在胶质瘤干细胞侵袭特征观察，肿瘤血管细胞起源探讨，肿瘤干细胞融合宿主细胞的生物学行为研究，胶质瘤干 细胞诱导宿主细胞癌变等J’．阔范隔内应用，对进一步研究肿瘤组织重构，肿瘤微生态学和治疗靶等都有重要意义。 225