通用山羊痘病毒TK基因缺失转移载体的构建.pdfVIP

吉林农业大学学报 2008，30(5)：739～742 http：／／xnebao． u．edu．cn JournalofjilinAgrciulturalUnive~ity E-mail： @rip．sina．corn 通用 山羊痘病毒 TK基因缺失 转移载体 的构建 郭 巍 ，曲娟娟2，相文华r，李一经2 (1．中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术 国家重点实验室，哈尔滨 150001；2．东北 农业大学动物医学院，哈尔滨 150030) 摘 要：用PCR方法克隆了山羊痘病毒疫苗株(GTPV-TY)的TK基 因，根据rn(基因结构，设计了2对引物分 别扩增得到与TK基因部分相邻的长度约 1kb的同源重组臂序列，分别插入到pGEM-Teasy载体，通过 SmaI 位点重新连接，并在此位点插入CMV启动子、多克隆位点、BGHpolyA信号以及LacZ基因，构建了通用 山羊痘 病毒TK基因缺失转移载体 。此转移载体为改造 GTPV-TY株以及开发二价或多价基 因工程疫苗奠定了 基础 。 关键词：山羊痘病毒；TK基因；转移载体 中图分类号：S852．654 文献标识码：A 文章编号：looo-5684(2oo8)o5—0739—04 ConstructionofA UniversalGoatPoxVirus DeletedTK TransferVector GUOWei’，QUJuan—juan，XIANGWen—hua’，LIYi—jing (1．NationalKeyLaboratoryofVeterinaGBoitechnology，Ha~inVeterinaryResearchInstitute，CAAS， Harbin150001，China；2．CollegeofVeterinaryMedicine，NortheastAgricultureUniversity，Harbin 150030，China) Abstract：ThethymidinekinasegeneofgoatpoxvireswasclonedbyPCR．Th esequencesneartheTK genesusedas homologousrecombinantanllswhichwereaboutlkbwereamplifiedbyPCR wiht primer pairs，nadtheywereinsertedintopGEM—T easyvector．ThegoatpoxvirusdeletedTK transfervector pdTKwereconstructedbyre—linkedhtehomologousrecomb inantan31sonhteSma工site，nadCMVpm— moter，multiclonesit，BGH polyA，LacZgeneswereinsertedintohteSniaisite．Th isrecomb innattrans— fervectorareexpectedtobeusefulforhtedevelopmentofGTPV—TY geneengineeringvaccine． Keywords：goatpoxvires；TK gene；trnasfervcetor 山羊痘病毒 (Goatpoxvirus，GTPV)能够引起 区、中东、土耳其、伊朗、阿富汗、印度、中国等国家 绵羊和山羊痘病。该病毒具有较强的抵抗力，在 和地区流行，世界动物卫生组织 (0IE)将其列为A 自然界可以长期存活(在痂皮中存活3～6个月)， 类疾病 ，我国将其规定为一类动物疫病 ]。 能感染所有 日龄羊，羔羊的感染率高达 100％，并 在动物病毒基因工程疫苗研究领域中，迄今 引起严重的临床问题。羊痘在非洲的赤道以北地 最成功的是伪狂犬病病毒 (