9牡丹ACC氧化酶基因片段的克隆和其反义表达载体的构建.pdfVIP

2009年第 1期 牡丹 ACC氧化酶基因片段的克隆 及其反义表达载体的构建 施 江，高双成，孔祥生 ，刘素云，郭永新，陈春燕，郁飞燕 (河南科技大学 农学院，河南 洛阳 471003) 摘要 ：利用 CTAB改良法提取牡丹洛阳红花辩总 RNA，通过反转录酶和设计的ACC氧化酶基 因 特异引物合成 709bp目的片段 ，进行测序和 比对 ，以确定 目的片段的正确性。在 709bpACC氧化 酶基 因片段和 pBI121植物表达栽体上选择合适的酶切位点，进行 XbaI和 SmaI双酶切。将 709bp片段上切下的510bp片段反向插入 pBI121植物表达载体 35S启动子后面，构建成含 510bp 牡丹 ACC氧化酶基 因反义表达栽体 。最后采用电击法转化进感受态农杆茵GV3101，以备用于花 粉管通道法转化牡丹 。 关键词 ：牡丹；ACC氧化酶 ；克隆；反义表达栽体 中图分类号 ：$685．11 文献标识码 ：A 文章编号 ：1004—3268(2009)01—0094—04 CloningofACC OxidaseGeneofTreePeonyand theConstructionofAntisenseExpressionVector SHIJiang，GAO Shuang-cheng，KONG Xiang-sheng’， LIU Su—yun，GUO Yong-xin，CHEN Chun-yan，YU Fei—yan (CollegeofAgriculture，HenanUniversityofScience Technology，Luoyang471003，China) Abstract：ThetotalRNA wasextractedfrom thepetalsofLuoyanghong--acultivaroftreepeo— ny，and709bpobjectivefragmentwassynthesizedbytheactionsofreversetranscriptaseandACC oxidasegenespecificprimer，then sequencedandcompared ittoconfirm thecorrectness．The suitablerestrictionsiteswereehoosedinthe709bpACC oxidasegenefragmentandpBI121plant expressionvector，thencarriedoutXbaIandSmaIdigestion．The510bpfragmentcuttingfrom the7ogbpfragmentwasreversely insertedintopBI121plantexpressionvectorbehind35S pro— moter，constructing ofantisenseexpression vectorcontaining 510bp treepeony ACC oxidase gene．FinallythepBI121plasmidcontainingthe510bpobjeetivefragmentwastransformedinto thepermissiveagrobacterium GV3101bythemethod ofelectricshock，toprepareforgenetic transformationtreepeonybythemethodofthepollentubepathway． Keywords：Treepeony；ACC oxidase；Cloning；Antisenseexpressionvector 牡丹雍容华贵 、富丽堂皇，深受人们的喜爱。但 就成为一个迫切需要解决的问题 。史 国安 h引、杨 是牡丹的花期较短 ，且花期较集中