抗冻蛋白在超低温保存中作用机制的新模型.pdfVIP

维普资讯 抗冻蛋 白在超低温保存 中作用机制的新模型 钱卓蕾 王君晖” 边红武 韩 凝 (浙江大学生命科学学院 杭州 310012) 在 超 低 温 保 存 (cryopreservation，一80℃一 降低了红细胞的存活率r。超低温保存水稻悬浮 一 196~2)中，抗冻蛋 白(antifreezeproteins，AFPs)对 细胞 ，由于抗冻蛋 白浓度、具体保存方法 、冷冻保护 细胞存活率 和热力学特性 的影 响十分复杂L1J。在 剂组成与浓度 以及细胞生理特性等方面的差异 ，抗 一 些实验条件下 ，抗冻蛋 白表现出保护活性 ；在另一 冻蛋 白的积极效应与消极效应均可被 观察到L8_。 些实验条件下，它却表现出毒害性。换句话说，它既 抗冻蛋 白作用的两面性也可用低温显微镜技术和差 能阻遏冰晶生长 ，又能促使成冰核效应 (icenucle． 示扫描量热仪 (differentialscanningcalorimeter)观 ationeffect)发生 。在总结最新实验结果 的基础上 ， 察 [7l。 结合抗冻蛋 白进化和结构生物学方面的新进展 ，我 二 、抗冻蛋 白的确切功能及其影响因素 们提出了一个新模型L2J，该模型对抗冻蛋 白功能的 两面性作 了较好 的诠释 。 为 了全面 了解抗冻蛋 白的功能，有必要总结一 下抗 冻蛋 白在 低温保 存 中(hypothermicpreserva— 一 、 超低温保存 中应用抗冻 tion，4～～20℃)的作用 。这方面的结果分成三组 ： 蛋 白的基本实验结果 一 些报道认为，抗冻蛋 白是膜保护剂 ，其机制是封 闭 抗冻蛋 白具有三个显著特性 。第一，通过阻遏 离子通道 ，从而平衡 了跨膜 电解质梯度 (transmem— 冰晶的正常生长习性而使体液维持过冷状态_33_；第 braneelectrolytegradients)LgJ。另一些报道认为 ，抗 二 ，具有 阻止重 结 晶 (recrystallizationinhibition)的 冻蛋 白是膜毒害剂，所有类型的抗冻蛋 白都使菠菜 能力 ；第三 ，低温环境 中作为质 膜 的保护 剂_5_。 类囊体冻害加剧 【J。还有一些报道认为抗冻蛋 白 正是这三个特性促使科学家们在超低温保存中应用 具有膜保护作用，但它是与磷脂双分子层发生相互 抗冻蛋 白。实际作用效果分为 以下三种结论 。 作用 ，而不是与离子通道发生相互作用 。将脂质体 1．抗冻蛋 白是有效 的保护剂 作为模式系统来检查抗冻蛋 白与脂质膜 的相互作 研究认为，1—40mg／ml不 同分子量的抗冻蛋 用 ，荧光素标记显示 ，抗冻蛋白十分有效地阻止 了标 白都有助于保持细胞结构完整性 。猪未成熟卵母细 记物 的渗漏 1【1，J。 胞和二细胞胚玻璃化保存时，40mg／ml的抗冻糖蛋 将低温保存和超低温保存 中应用抗冻蛋 白的最 白(antifreezeglycoproteins)对维持细胞结构的完整 新结果进行全面总结 ，我们可 以得 出以下结论 ：抗冻 性起到了惊人的作用 ，证实这些蛋 白质具有阻止膜 蛋 白能和细胞膜作用 ，但有时起膜保护作用 ，有时起 表面冰 晶形 成 的能力L5J。小 鼠卵母 细 胞在 0℃ 膜毒害作用 ；抗冻蛋 白能和冰晶作用 ，但有时抑制冰 6mol／L~-甲亚砜加 lmg／ml抗冻糖蛋 白的冰冻保 晶生长 ，有时促进冰 晶生长，两者的平衡取决于许多 护剂中处理后置于液氮保存 ，受精