DNA甲基化分析技术.pdfVIP

—304 — Chin J Lab Diagn ,April ,2005 ,Vol 9 ,No. 2 ( ) 文章编号 :1007 - 4287 2005 02 - 0304 - 03 DNA 甲基化分析技术 黄 　庆 ,府伟灵 (第三军医大学西南医院 检验科 ,四川 重庆400038) ( ) 　　甲基化胞嘧啶 5 ’methylated cytosine , 5mC 被 状态和模式。将 Southern 杂交和 PCR 技术引入酶切 称之为人类 DNA 的第 5 种碱基。肿瘤表观基因组 产物的后续分析大大提高了检测灵敏度 ,特别是当 (cancer epigenomics) 概念的提出和人类表观基因组 DNA 数量有限时若采用 PCR 技术可大大节约 DNA ( ) 计划 Human Epigenetic Project , HEP 的实施将表观 的用量 ,此外 , PCR 技术的引入还可对甲基化 DNA 遗传学研究又推向了一个新的高度[1 ] 。了解 DNA ( 进行定量分析 , 如固相定量引物延伸方法 solid 甲基化分析技术的原理、适应范围和优缺点有利于 phase quantitative primer extension method) 、竞争性引 研究者根据自身不同需求和设备条件来选择有效方 ( ) 物结合位点 competitive primer binding sites 技术、连 法达到最终目的[2 ,3 ] 。 接物引导 PCR (ligationmediated PCR , LMPCR) 和单 1 　DNA 甲基化非特异性分析 核苷引物延伸反应等[2～4 ] 。不过 , 由于限制酶自身 属于早期的 DNA 甲基化分析技术,其主要特征 的特性使该技术只能判断酶切位点所在序列的甲基 是只能分析基因组水平的 5mC 比例,主要包括高效 化状态 ,因此 ,如果使用了不同的酶切体系可导致不 液相色谱、高效毛细管电泳、薄层层析、M . Sss I 甲基 同研究者之间的结果存在差异而缺乏比较性。 转移酶分析、去水乙缩氯醛反应、5mC 免疫学抗体技 22 　依赖于重亚硫酸盐修饰的检测技术 　是指利 术等[2 ,3 ] 。随着人类基因组计划的完成及 HEP 的实 用重亚硫酸盐对胞嘧啶和 5 mC 修饰的差异而达到 施 ,单纯地判断基因组 5mC 水平已经不能满足现代 鉴别二者的一类技术 ,重亚硫酸钠修饰后胞嘧啶被 表观遗传学研究的需求。 转变成尿嘧啶 ,而 5 mC 则在修饰前后保持不变。因 2 　DNA 甲基化特异性分析 此 ,利用 DNA 测序技术或 PCR 技术等可达到对 5mC 是一类可分析特