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·72 · 生物化学与生物物理进展 Prog. Biochem. Biophys. 2003 ; 30 ( 1)
H O 诱发人成纤维细胞衰老样变化的基因表达谱
2 2
马 宏 张宗玉 童坦君
(北京大学医学部 生物化学与分子生物学系 , 北京 100083)
μ
摘要 以50 mol/ L H O 作用体外培养的人胚肺二倍体成纤维细胞 4 次 , 使之出现不可逆的衰老表型. 提取年
2 2
轻细胞及 H O 处理早老细胞的 mRNA , 以荧光物 Cy3 标记年轻细胞 cDNA , Cy5 标记 H O 处理的细胞 cDNA ,
2 2 2 2
并与点有4 096条人类基因的芯片杂交 , 利用计算机数据处理判断基因是否存在表达差异. 结果显示 : 有 123 种
基因的表达变化较显著 , 这些基因参与细胞周期进程、细胞代谢及蛋白质修饰、细胞外基质及细胞骨架蛋白的
形成和调节、炎症反应、调节受体酪氨酸蛋白激酶和 G 蛋白耦联受体信号转导.
关键词 基因芯片 , 基因表达谱 , 早老 , 复制衰老 , 氧化压力
学科分类号 Q26 , Q52
活性氧基团 (reactive oxygen species , ROS) 引 液 , 于 37 ℃5 % CO2 条件下培养 , 长至 80 % ～
起生物大分子的氧化损伤被认为是影响细胞衰老进 90 %融合时 , 1 瓶细胞分存两瓶 , 传代. 30 代以下
程的重要因素. ROS 有许多种 , H O 分子小 , 无电
2 2 为年轻细胞 , 55 代以上为老细胞. 细胞培养至 28
荷 , 可以自由渗透质膜 , 并且相对稳定 , 是体外培 代 , 当长至 60 %～70 %融合时 , 倒掉培养液 , 加
养细胞最常用的“早老”诱导剂. H O 诱导人成纤
2 2 μ
入含 50 mol/ L H O 的 PBS 于 37 ℃孵育 30 min ,
2 2
维细胞出现明显的衰老样改变 , 如胞体变大、扁平 , 倒掉 H O 溶液 , 以 PBS 洗两遍 , 加入含 10 %胎
2 2
胞浆内颗粒增多 , 细胞排列不规则 , 生长阻滞于 G1 牛血清的 DMEM 培养液孵育 , 每隔两天作用一
期等 , 但目前对其分子机理还知之甚少.
次 , 共作用 4 次 , 提取总 RNA.
本文以亚致死量的 H O 重复 4 次处理体外培
2 2 β
2 2 衰老相关的 半乳糖苷酶染色
( )
养的
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