AL及其在猕猴桃种质鉴别和分类上的应用FP.pdfVIP

第28卷 第5期 肇 庆 学 院 学 报 Vo1．28，No．5 2007年9月 JOtmNALOFZHAOQINGUNIVERSITY Sep．2007 AFLP及其在猕猴桃种质鉴别与分类上的应用 陈 华 (肇庆学院 生命科学学院，广东 肇庆 526061) 摘 要 ：AFLP~．．一项新的DNA指纹技术，它结合 了RFLP和PcR技 术的特点 ，具有 LP技 术的可靠性和 PCR．技术的高效性．在综~AFLP技术的原理与影响因素的基础上，对其进行 了评价，并总结了AFLP技术在猕猴 桃种质鉴别与分类上 的应用． 关键词~AFLP；分子标记 ；猕猴桃 中图分类号：$663．4 文献标志码：A 文章编号 ：1009—8445(2007)05-0060-04 0 前 言 随着分子生物学的发展 ，出现了许多DNA指纹技术．例如 ：R．FLP(restrictionfragmentlengthpoly- morphism，限制性片段长度多态性)，RA．PD(random amplifiedpolymorphism DNA，随机扩增多态性DNA)， SSP,．(simplesequencerepeat，简单 串联重复性序列 )，AFLP(maplifiedrfamg entlength polymorphisrn， 扩增片段长度多态性)等．这些技术在品种鉴别、目的基因定位及遗传 图谱构建等研究中得到了广 泛应用 ，对植物基因组研究产生了深刻的影响．这几种方法各有优势与不足 ：RFLP结果稳定可靠、 重现性好，但其实验流程长 、耗资大、信息量小 ，需要使用放射线 同位素 ；R．APD具有简便快速、成本 低、信息量大、引物通用及可不用放射线同位素等优点，但其可靠性与重现性低 ；SSR稳定可靠、信 息量大，速度快且可不用同位素 ，成本不太高 ，但是其前期研究费时费力 ，代价 昂贵．AFLP兼有R．FLP 与R．APD的优点，信息量大且可提供无 限标记数 目，但其成本高 ，对技术要求苛刻．在众多关于各种 分子标记技术间比较的综述[1-4]中，AFLP因其具有较高的可靠性和高效性 、多态水平最高、检测位 点最多、识别率最高、速度快 、Tm值高及DNA用量少等特点，被认为是迄今为止最有效的分子标记． AFLP技术现已应用于生物学的各研究领域 【】，但对其在猕猴桃属植物的应用研究还比较少 ，本文 中，笔者试图就此问题作一综述． 1 AFLP技术的原理及流程 1．1 原理 AFLP技术是1992年 由荷兰Keygene公司科学家ZabeauMarc和VosPieter发明创建的一种DNA分 子标记新技术．该技术于1993年获得欧洲专利局专利 (专利号EP0534858A1)，专利权属于Keygene公 司，该公司于1994年推出了商品化的试剂盒 ，称为AFLP分析系统I． AFLP是ILFLP与PCP,．相结合 的一种技术 ，其基本原理是对基 因组DNA限制性酶切片段的选择 性扩增 ，使用双链人工接头与基因组DNA的酶切片段相连接作为扩增反应的模板．接头与接头相邻 的酶切片段的几个碱基序列作为引物的结合位点．引物 由3部分组成 ：1)核心碱基序列，该序列与人 工接头互补；2)限制性内切酶识别序列 ；3)引物3’端的选择碱基．选择碱基延伸到酶切片段 区，这样 收稿 日期：2007--04-03 作者简介：陈 华(1978-)。女．江西萍乡人。肇庆学院生命科学学院讲师 ．硕士． 第 5期 陈 华 ：AFLP及其在猕猴桃种质鉴别与分类上的应用 61 就只有那些两端序列能与选择碱基配对 的限制性酶切片段被扩增 ．扩增片段通过变性聚丙烯酰胺 凝胶 电泳分离检测．由于接头和引物是人工合成的，所以在无须事先知道DNA序列信息的前提下， 就可 以对酶切片段进行经典的PCR扩增 ．为了使酶切片段大小分布均匀 ，一般采用2个限制性 内切 酶，一个酶为多切点 ，另一个酶 的切点数较少 ，因而AFLP反应过程 中产生的主要是2个酶共 同酶切 的片段 ，一般小于500个碱基对 ．采用双酶切 的原 因主要有 ：1)多切 点酶