ISSR分子标记技术在金叶女贞品种鉴定中应用.pdfVIP

安徽农学通报，Anhui姆 i．Sci．Bul1．2008，14(22) 39 ISSR分子标记技术在金叶女贞品种鉴定中的应用 李延龙 张 明 曹秀敏 胡青坡 乔宝健 (平顶山市农科院，河南平顶山467001) 摘 要：利用ISSR分子标记技术，鉴定发生变异的金叶女贞品种。将变异品种与原品种用改进的CTAB法提取DNA， 进行PCR扩增和电泳成像，发现两个位点有差异，表明变异品种为一新品种，为金叶女贞品种鉴定开启了一个新方 法 。 关键词：ISSR；分子标记；金叶女贞；品种鉴定 中图分类号$79 文献标识码B 文章编码1007-7731(2008)22-039-02 传统的品种鉴定方法多以表型性状为依据 ，虽然方法 反应体系，各反应成分用量分别为 ：10Xbuffer、0．6 l的 直观简易，但缺乏客观性，且受 自然环境影响较大。因此， 25mmol／LMgC12、dNTP、1U的Taq酶，4 l浓度为0．6mmol／1 鉴定结果的准确性差。利用DNA分子标记技术，从分子水 的引物、40ng模板DNA，最后用ddH20~,[足至l0 1。引物采 平判断品种差异，准确性高，不受环境影响，近年来在植物 用上海生物工程公司制造的ISSR~I物，经过筛选，ISSR一3 品种鉴定方面得到广泛应用。ISSR技术是一种 以PCR扩 (碱基序列为ACACACACACACACACTT)和ISSR一22引物 增为基础的分子标记技术 ，作为随机引物广泛应用于不同 (碱基序列为ACACACACACACACACAA)扩增特异性效果 基因序列的物种鉴定中。所用引物是基于简单序列而设计 较好 。 的寡核苷酸序列 ，该技术 的特点是以16～18个核苷酸的重 ISSR扩增反应程序 ：94％预变性3rain，然后进行35个 复序列为引物直接在基 因组DNA中进行PCR扩增，以琼脂 循环为94oClmin、52．3℃ lmin、72℃ 1．5min，72℃终延伸 糖或聚丙烯酰胺凝胶电泳即可检测，扩增谱带丰富(何平 15min，之后于4℃下保存。反应在iCyclerThermalCycler型 1998l【)。目前分子标记技术在园林树种中应用较少，其中 梯度PCR仪(美国BIO—RAD公司产品)上进行。 在金叶女贞品种鉴定中的应用 尚未见过报道。本实验通过 2结果与分析 ISSR技术对表型性状发生变异 的金叶女贞进行扩增 、电 DNA扩增产物在4％聚丙烯酰胺凝胶 电泳 中分离，电 泳 ，同未变异品种相比，发现部分基因位点的差异，证明变 压170V，电泳时间lOOmin。结果详见 图1。从图1可以看出， 异品种为一新品种 ，为金叶女贞品种鉴定开启 了一个新方 ISSR一3扩增结果 ，“平抗金叶女贞 ”在3O00bp左右有2条 法 。 带，而原品种没有；ISSR一22扩增结果，与原品种相 比，“平 1材料与方法 抗金叶女贞”在2O00bp左右有扩增产物出现 ，而原品种没 1．1供试材料：金 叶女贞和平抗金 叶女贞 金 叶女贞 有。以上结果清晰表明，所选育的芽变品种(暂命名为 “平 (Ligustrumxviearyi)是由加州金边女贞与欧洲女贞杂交 抗金叶女贞”)为原金叶女贞品种在某一基 因位点发生基 育成，落叶或半常绿灌木 。叶色金黄 ，单叶对生 ，叶薄革质， 因突变产生的单位点 自然变异品种。 常椭圆形，叶端锐尖或钝，叶基部圆形或阔楔形，圆锥花 序 ，花梗明显，裂片镊合状排列 ，花冠筒 比花冠裂片短 ，花 色 白色。平抗金叶女贞由平顶山市农科院在金叶女贞中通 过 自然变异产生的芽变选育而来，与原品种相比，“平抗金 叶女贞”的表型特异性主要表现在抗病上与原品种有极大 差异 ，其余表型特性基本一致。 1．2D