DHL细胞中5-ALA代谢PpIX双光子荧光光谱.pdfVIP

第28卷，第1l期 光谱学与光谱分析 200 and 8年11月 SpectralAnalysis November，2008 Spectroscopy DHL细胞中5-ALA代谢PplX的双光子荧光光谱 黄祖芳1，陈 荣¨，李永增1，陈冠楠1，陈显凌2，冯尚源1，贾培敏3 I．福建师范大学．医学光电科学与技术教育部重点实验室，福建福卅I350007 2．福建医科大学附属协和医院血液研究所，福建福州350001 3．上海第二医科大学附属瑞金医院．上海血液学研究所，上海200025 摘要双光子激发生物组织荧光，激发光仅作用于焦点区域，对生物样品的光漂白性和光毒性都很小，因 而双光子荧光显微技术已成为细胞生物学研究的一种新技术。文章采用波长为820nlTl飞秒激光激发孵育有 5一ALA的DHL细胞，在激光扫描显微镜的Lambda模式中获得单个DHL细胞的双光子荧光光谱，并测量 mmol·L_1的5一ALA溶液中， DHI。细胞内积聚的卟啉九(PpIX)特征荧光值。获得了浓度分别为2，4和10 细胞代谢的PpⅨ含量随孵育时间的变化情况。DHL细胞内积聚的PpIX处于动态变化过程，并呈现出两阶 段性的特点：细胞内积聚的PpIX含量随着孵育时间增长而增加，在3h附近达到最大值，随后随着孵育时 间增长反而下降。结果表明，基于激光扫描显微的双光子荧光光谱可成为DHL细胞等白血病细胞摄取5一 ALA并生成PplX的动力学研究的有效方法。 关键词 双光子激发荧光光谱；5-氨基酮戊酸；卟啉九；DHL细胞 中图分类号：0657．3文献标识码：A 1000-0593(2008)11—2636—04 DOI：10．3964／j．issrL 下又会被转化合成血红素，即细胞内合成的PplX处于动态 引 言 平衡，因此细胞中加入5一ALA后的孵育时间是影响PpIX积 聚的重要考虑因素。本文尝试用双光子激发孵育有5一ALA 细胞内摄取并积聚的光敏剂含量及其随时间的变化，即 的DHL细胞，获得DHL细胞的荧光光谱，希望研究孵育有 细胞药代动力学，是Pcrr研究的关键问题。光敏剂在细胞中 代谢规律，以往研究主要是利用荧光分光光度计测量在不同 间的变化情况，并寻找研究细胞药代动力学的新方法。 孵育时间，细胞内积聚的光敏剂特征荧光峰强度值，然后对 比标准曲线间接获得细胞中的光敏剂含量。此类方法的缺点 1材料和方法 是操作烦琐r1]，而且并不能直接测量出单个细胞的实际光敏 剂含量，误差较大。 1．1试剂与仪器 双光子激发扫描显微术是细胞生物学研究采用的技术， 5一氨基酮戊酸(5-aminolevulinic 由于激发光源采用超快飞秒红外激光器，具有非常高的峰值 功率和较低的平均功率，且对于双光子非线性激发，它仅作 季青公司。其他试剂均为分析纯。 ZeissLSM 用于1脚左右的区域[引，与常规荧光激发技术相比具有对 激光扫描共聚焦显微镜(Carl 510)；双光子激 样品的光漂白区域和光毒性小，高信噪比和成像亮度。因此 长可调范围：700～980 更适合于细胞和生物组织活体的观察与研究[3]。 n