中国林蛙分子系统关系.pdfVIP

维普资讯 动 物 学 研 究 2001．Feb．22(1)：27一∞ CN53—1040／Q ISSN0254—5653 Zooto#ca~Research 中国林蛙的分子系统关系 江建平①② 周开亚④ (①南京师范大学遗传资源研究所 南京 21OO97)(②中国科学院成都生物研究所 成都 610041) 摘要 ：测定了6种林蛙和用作外群的2种侧褶蛙和 1种陆蛙的线粒体 12SrRNA基因序列393b口。序列两两 对位比较表明内外群间的位点替换率是 7．3％到 23．1％，内群中物种阃则为0．0％到92％。依据上述DNA序 列，用距离法和最大简约法的系统发育分析表明：①研究的6种林蛙聚为一支，构成单系群，井有高的BPs值 (90％以上)支持；②6种林蛙可以分戚 2个姐妹群，即中国林蛙、黑龙江林蛙和桓仁林蛙为一组 (BPs 94％)，峨眉林蛙、昭觉林蛙和镇梅林蛙为一组 (BPs50％)；③昭觉林蛙与镇海林蛙有较近的亲缘关系；④ 中国林蛙的榆中种群与牡丹江种群问的遗传分化似乎达到了种级分化水平。 关键词：林蛙；mtDNA；12SrRNA基因序列；分子系统学 中图分类号：Q959．53 文献标识码：A 文章编号：0254—5853(2001)01—0027—06 林蛙又名 “褐色蛙”或 “棕色蛙 ” (brown 的序列人手探讨31本和部分邻近国家和地区林蛙的 frog)，是以欧洲林蛙 (Rana m M妇)为代表的 系统发生关系。本文拟从测定线粒体基 因组 中的 一 个 自然类群。费梁等 (1990)把我国隶属蛙属 12S核糖体 RNA (rRNA)基因片段的序列人手探 (Rana)的物种重新划分为 11个属，其中林蛙类 讨一些中国大陆林蛙的系统发生关系。 单独成属即林蛙属 (Rana)。谢锋等 (1995)对林 l 材料和方法 蛙属的系统学研究历史和有待解决的问题进行了综 述 ，并认为世界上有林蛙约29种 ，中国有 10种 1．1 标本材料 林蛙属的绝大多数物种已有核型资料。根据核 共采集林蛙属 6种，侧褶蛙属 (Pelophylax)2 型的情况可把林蛙分成两大类，一类为 2n=24， 种，陆蛙属 (Fejervarya)1种 ，见表 1。 另一类是 2n=26。谢峰 (1996)依据形态性状对 1．2 总 DNA的提取 中国产 12种林蛙进行了系统发生研究，其结果表 采用 SDS／~ 白酶 K裂解 ，酚氯仿抽提法从保 明林蛙属东洋界分布的原隶属于 13本林蛙的各物种 存于 75％的酒精或 一20℃冻存的腿部肌 肉提取总 (峨眉林蛙 、峰斑林蛙、镇海林蛙、昭觉林蛙和长 DNA。 肢林蛙)为一个单系群；初步认为我国林蛙染色体 1．3 目的基因片段的扩增与序列测定 2n=24的物种 为一个 并系。而 Tanakaeta／． 应用通用引物L1091(5．GCTrCAAACTGGGAT． (1996)根据对31本的林蛙属物种的线粒体细胞色 TAGATACCCCACTAT．3)，H1478 (5-TGACTGCA— 素 b (cytb)基因序列分析结果，认为2n=24的3 GAGGCT姒 CGGcCGGTGTGT-3)(Kochereta1．， 个种构成一个单系群。 1989)扩增和测定线粒体 12SrRNA基因部分序列。 有关林蛙类的分子系统学研究，31本学者做了 扩增产物用Wizard~PCRPrepsDNA纯化试剂盒 比较多的工作，如Tanakaeta／．(1996)，Tanaka． (Promega公司)纯化。两条互补链均测定序列，多 Uenoe／．a1．(1998a，1998b)。他们的研究工作主 数序列用银染测序技术