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生命科学综合实验 2 向鹏程1353357 Abstract: miRNA 是一类长 20~22 的小分子非编码 RNA，它可以与靶基因 mRNA3非翻译序列结合从 而促进靶基因降解或抑制翻译过程，进而抑制靶基因的表达。本实验通过 6 个连续实验， 经过克隆以及相关蛋白和核酸分析，来进一步了解 miRNA 的功能，理解并掌握基因工程的 基本思路和分子生物学、细胞生物学的核心技术。 Keyword： miRNA-194；western blot；RT-PCR；DNA 抽提；RNA 抽提；蛋白质抽提；MTT 实验； pSuper 载体；shRNA ；转染。 Introduction: miRNA 参与生物体的生长、发育和凋亡的调控，并在疾病发生和发展过程中起着重要作 用。基于 miRNA 所产生的多种多样的生物学功能，近年来对 miRNA 的研究成为科学研究 的热点之一。 克隆获得特定的 miRNA 是研究其功能的前提。重组质粒经测序验证后经过质粒抽提，进 而转染真核细胞，基于本实验涉及的质粒 pSuper 带有 EGFP 标记，可以在荧光显微镜下观 察转染效率，通过 MTT 实验检测 microRNA-194 过表