“交叉通讯”在人垂体生长激素腺瘤激素分泌中的调控作用研究.pdfVIP

维普资讯 蕾■珥字 杂志，2005，15(2)：11～14 ⑥ 2005 0Ⅲ EsEJOURNALOFMICROCIR~ TION “交叉通讯在人垂体生长激素腺瘤激素分泌中 的调控作用研究* 张华楸 王雄伟 范月超 王和平 叶 飞 雷 霆 【中图分类号] R736．4 R466．11 [文献标识码] A [文章编号] 1005—1740(2005】02—00ll一04 日 体生长激素(GrOwthHormone，GH)腺瘤是 洗涤 2次。(2)无菌情况下，将组织剪为 1n1m 小 _一：：|以生长激素过度分泌为主要特征的垂体腺 块 ，洗涤离心后去上清。转入 MEM 培养基 (含 20 瘤。研 究发现 ，垂 体生长 激素 释放激 素 mg／L链霉素 ，1o5u／L青霉素 、200mr~l／LHEPES、 (GrowthHormoneReleasingHormone，GHRH)和肽 10％FCS胎牛血清)，0．1g／L胶原酶中，37℃温床上 类生 长 激 素 释放 剂 (GrowthHormoneSecreta— 消化 1～2h，至肿瘤细胞离散。(3)离心后，去上清，加 gogues，GHSS)是 目前 已知促进 GH分泌途径 中最 入上述培养基洗涤一次，再混入 MEM培养基中。(4) 重要的两类。前者通过细胞 内第二信使 cAMP介 将每例肿瘤实验时均分至 12支玻璃试管 中(1～3× 导发挥作用，后者则通过 GH释放剂受体 (GHS-R) 105个细胞 ／m1)，37℃培养 18～24h，使细胞平衡并 及其天然配体 ghrelin结合 ，并通过蛋 白激酶 C 得以贴壁后用 MEM培养基洗涤 1次，在新鲜培养基 (PKC)，Ca2等细胞 内信使促进 GH分泌。生长激 (2m1)中继续平衡 4～6h开始以下实验。 素释放肽(GHRP一6)是一种人工合成 的肽类生长激 1．3 细胞分组干预实验 素释放剂，与 ghrelin生物学功能极其相似。已有研 将上述每例培养细胞 (12管)分为5组。 究发现，以上两种调控方式在细胞内信号传导上可 1～3管 中分别加入 GHRP一6(10～ mol／L， 能存在着 “交叉通讯”。为此 ，本实验在体外细胞培 PeninsulaLaboratories，Merseyside，U．K)，GHRH(2 养基础上，对以上两种信号传导系统采用交叉使用 ×10 mol／L)及 两 者 的混 合 液 (GHRP一6+ 拮抗剂的方法，并通过放射免疫检测等手段监测 GHRH)。此为第一组 ，主要观察三种情况下GH分 GH释放和部分信号分子的变化，观察人垂体 GH 泌量、cAMP浓度和磷脂酰肌醇 (PI)转换率的变化。 腺瘤细胞 的激素释放中多个信使的功能及相互作 4～6管 中依次加人 GHRP一6与蛋 白激酶 A 用 (PKA)抑制剂 (Rp，2nmol／L)、GHRH一6与 GHRH 拮抗剂 (Ac)、GHRP一6与 PKC激活剂 (TPA，Sigma) 1 资料和方法 的混合 液。此 为第 二组 ，验 证 GHRH 途径 和 1．1 研究对象 GHRP-6途径 的关系，以及 PKC，PICA两类信号分 标本取 自6例临床上有肢端肥大表现 的患者 ， 子在GHRP一6途径中的作用。 术前MRI提示为垂体腺瘤。并经术前血清 GH检 7～8管依次加入 GHRH和钙调蛋 白抑制 测，术后病理检测和免疫组化染色证实为垂体 GH (W7，20umol／L)、GHRH 和 PKC拮抗剂 (stau，10 腺瘤。 umol／L，Simg a)。此为第三组。研究 Ca2 、PKC两 1．2 细胞培养 类信号分子在 G