缺氧影响erbB癌基因在大鼠肺内的表达.pdfVIP

维普资讯 7—2 中国病理毕理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 1997，13(3) 249 缺氧影响 erbB癌基因在大 鼠肺 内的表达 所 冉丕鑫欧阳能太杜志强邱志辉 陈顺存钟南山 fc、『。 z 枢 鑫 欧 辉 钟南山 摘 要 映氧性肺动脉高压的确切发病机理 目前仍不甚清楚 本文以原位杂交技术观察了癌基 INerbB在缺氧大鼠肺 内的表达情况．结果发现缺氧 7天后．大鼠肺组织I~1erbBmRNA表达明显增加 OOO1)．井一直持续至缺氧 21天后．提示erbB癌基因可能与缺氧引起的肺血管结构的改建过程有关t ． 主题词竺皇症·肺脏·大鼠塞‘塑 醑j力闩讯 ， f啼右丧 慢性 阻塞性肺病多因通气功能障碍而致低 示右心室增厚程度。 氧症，缺氧早期可使肺血管收缩，长期缺氧则出 三、原位杂交： 现肺血管壁增生变厚、管腔狭窄并最终 出现肺 (一)探针标记 ：erbBDNA探针购 自北京 动脉高压，尽管以前对缺氧 陛肺动脉高压的发 原平生物技术公司，探针长度 2．5kb，用地高辛 生机制研究颇多，但其确切的机理仍不甚清楚， 作为标记物 ，按随机引物法标记探针 ，具体步骤 本实验应用原位杂交技术观察了慢性缺氧对 按盒 内说明书操作 (地高辛配体 DNA标记及 大鼠肺 内erbB癌基因mRNA表达 的影响，以 检测试剂盒购 自德国BoehringerMannbei公 期探讨其在缺氧性肺动 脉高压发生中的可 能 司)。 作用 。 (--)杂交前预处理及杂交均按文献方法口 材 料 与 方 法 进行 。 一 动物来源及缺氧方法 ： (三)对照实验 ：本实验设立阴性对照实验 将体重 250～300g的雄性 SD大 鼠(广东 包括 ：不加探针杂交，加未标记 的探针杂交，用 省卫生厅医用实验动物厂，验证字第9302l号) RNase处理组织切片后杂交。 随机分成缺氧 7天组、缺氧 l4天组、缺氧 2l 四、结果处理 ： 天组和不缺氧对照组。按文 献报道方法口】对动 (~-)R／L+S以 s表示，各组间行 检验 物进行缺氧，简言之，将大鼠置于 自制常压缺氧 判断结果差异的显著。 箱 内，控制箱 内氧浓度为 lO％，每天缺氧 8h， (二)杂交结果处理：每只动物选 3张切片 对照组大鼠除吸入空气外，其它饲养条件与缺 行杂交检测，每张切片随机选取 5个视野分析： 氧组等同。 先计数阳性细胞个数 ，以阳性细胞数占视野 内 二 标本处理 ： 总细胞数的百分 比表示；之后检测细胞的光密 处死动物取 出心肺 ，取一肺 叶用 OCT包 度，以两者的乘积为总积分指数，取每只动物总 埋后进行连续冰冻切片，切片厚度 6加 余肺 共l5个视野总积分指数的均值作为该只动物 用改 良Bouin氏液固定24h，行常规石腊包埋 的总积分指数，组间行秩和检验 。 切片后作HE染色，挤出心脏内残血，剪去心房组 结 果 织，沿右室边缘剪下右心室，称取右心室 R【)和 一 右心室重量 ： 左心室 (L)+室间隔 (s)的重量，以R／L+S表