PCR方法检测2型猪链球菌2种毒力因子.pdfVIP

维普资讯 第 23卷 3期 扬州大学学报 (农业与生命科学版) Vo1．23NO．3 2002年 9月 JournalofYangzhouUniversity (AgriculturalandI．ifeSciencesEdition) Sep．2002 PCR方法检测 2型猪链球菌 2种毒力因子 何孔 旺 。，陆承平 ，倪艳秀。，王继春。，姚火春 (1．南京农业大学 动物医学院，江苏 南京 210095；2、江苏省农科院 农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室，江苏 南京 210014) 摘 要 ：根据 2型猪链球菌毒力因子溶菌酶释放蛋 白(MRP)与细胞外蛋 白因子 (EF)基 因 (mrp与 epf)序列，分别设计 、 合成--x~引物 ，建立聚合酶链反应 (PCR)3Y法 。该方法扩增 出2型菌株的mrp大小为 885bp，epf为 626bp，而对马链球 菌兽疫亚种 (c群)、猪丹毒杆菌、猪肺疫 巴氏杆菌、猪肺炎霉形体等 PCR均未扩增 出任何条带 。用 Xba1和 HneⅡ分另U酶 切 PCR扩增产物 ，均获得与预计一致 的酶切 图谱 ，PCR扩增产物测序结果显示 ：其基 因序列分别与 GenBank上 公布 的 mrp全基 因第 5。O～1315位碱基及 epf全基 因第 2441～3028碱基对一致 。PCR检测的敏感度可达 100个细菌 。甩建立 的PCR对从病猪体 内分离的菌株进行检测 ，检测的 15株 2型分离株中有 13株 mrp与 epf均为阳性 ，为典型的高 毒力表 现型菌株(mrp epf)，1株为 mrpepf一，1侏为 mrp—epf一。 关键词 ：2型猪链球菌 ；毒力因子 ；聚合酶链反应 中图分类号 ：S852．61 1 文献标识码 ：A 文章编号 ：1671—4652(2002)03—0001—04 DETECTION OFmrp／epfOFSTREPTOCOCCUSSUISTYPE 2BYPCR HE Kong—wang ‘，LU Cheng—ping ，NIYan—xiu。．WANG Ji～chun。．YAO Huo—chunI (】．CollofVetMed，NanjingAgricUniv，Nanjing210095，China： 2．LabofA，zid，z PoultryDisDiag，MOA，]iangsuAcadem3ofAgricSci．Nanjing210014．China) ABSTRACT ；PCR assaysweredevelopedfortherapidand sensitivedetectionofvirulentfactormrp andeDfgenesofStre 一 tOCOCCUSsuistype2．Thesiresofthemrp—geneandepf～geneofS．5uistype2werea885bpand626bpPCR produCtsrespec- tively．DigestedwithXbaI andHaeⅡ，thePCR productscouldproduce578bp／307bpand354bp／272bpDNA frag— m entsasexpected．ThesequencesofmrpandepfPCR prod uctswerethesam easshowed in GenBank． U singthesam e pairs，noPCR productwasdetected from S．equisimilis，E．rhusiopathiae，P ． pneumottopic口andM ．hv0pneu 0n e．TI1e sensitivityofthePCR forS．suistype 2was100cfuofthebacteria Of15strainsofS．5蠡 type2 isolated from diseased ． pigs，13weremrp十epf+exceptforSS2-HZ1 (mrp+epf一)and006444