人胚胎干细胞的培养条件和鉴别的方法学研究①.pdfVIP

姜景岩等　人胚胎干细胞的培养条件与鉴别的方法学研究　第 9 期 6·33 · ·免疫学技术与方法· 人胚胎干细胞的培养条件与鉴别的方法学研究① ② ③ 姜景岩 　孔北华 　曲 　迅 　马道新 　孙 　丽 　张友忠 　王 　波 　杨瑞芳 　王明毅 ( 山东大学齐鲁医院 ,济南 250012) 　　中国图书分类号 　R39233 　　文献标识码 　A 　　文章编号 　1000484X( 2003) ( ) ( [摘 　要] 　目的 :研究人胚肺成纤维细胞 human Embryonic Lung Fibroblast ,HELF 饲养层对人胚胎干细胞 Human Embryonic ) Stem Cells ,hES 细胞 生长的作用 ,摸索适宜的 hES 细胞培养与识别方法。方法 : 以流产胎儿肺组织制备 HELF 饲养层 ,取生殖 ( ) 嵴或背肠系膜及其周围组织 ,获得由人原始生殖细胞 human Primordial Germ Cells ,hPGCs 转化成的 hES 细胞。比较其在不同条 件下的增殖行为 ,并通过生物学特性鉴别该细胞系。结果 :HELF 饲养层在 LIF 存在的条件下有利于支持 hES 细胞的体外生 长 ;hES 细胞碱性磷酸酶组织化学染色及端粒酶 ELISA 检测阳性 ;具有正常的核型 ;在体外发展为类胚体。结论 :HELF 饲养层 和LIF 的协同作用能支持hES 细胞的生长 ;建立通过生物学特性鉴别 hES 细胞的方法。 [ 关键词] 　人胚胎干细胞 ;原始生殖细胞 ;成纤维细胞 ;饲养层 Research on the method of culture and identification of embryonic stem cells from human primordial germ cells JIANG JingYan , KONG BeiHua , QU Xun et al . Shandong University Qilu hospital 250012 , China ( ) [ Abstract ] 　Objective :To study the cooperated effect of Human Embryonic Lung Fibroblast HELF feeder layer and LIF in the culture ( ) ( ) of human Embryonic Stem hES cells and establish the method of identifying hES cells from Primordial Germ Cells PGCs . Methods :Embry onic lungs were mechanically disaggregated ,then cultured to establish HELF feeder layer. Gonadal ridges and mesenteries of embryos were me chanically disaggeregated ,then cultured and passaged in vitro. Comparing the growth characters of hES cells in different conditions. To iden