人血清脂联素定量ELISA检测方法的建立与初步临床应用.pdfVIP

第二军医大学学报 　2009 年 7 月第 30 卷第 7 期 http :/ / w w w . aj s m m u. cn ·8　　50 · Academic J ournal of Second Milit ary Medical U niver sit y ,J ul . 2009 ,Vol . 30 ,No . 7 DO I :10 . 3724/ SP . J . 1008. 2009 . 00850 ·短篇论著 · 人血清脂联素定量 EL ISA 检测方法的建立及初步临床应用 Development of quantitative EL ISA f or determination of serum adiponectin and its cl inical appl ication 1 1 2 2 2 2 2 3 2 李登清 ,陈琳磊 ,何笑恬 ,卫 　玲 ,曹 　琳 ,曹 　洁 ,徐晓晶 ,袁 　洪 ,金维荣 1. 中南大学湘雅医学院医学检验系临床微生物免疫学教研室 ,长沙 4 100 13 2 . 生物芯片上海国家工程研究中心 ,上海 20 1203 3 . 中南大学湘雅三医院 ,长沙 4 100 13 ( ) ( ) [摘要] 　目的:建立一种检测人血清中脂联素 A PN 的酶联免疫吸附方法 EL ISA ,并初步探讨其在冠心病诊断中的应用 。 ( ) ( ) 方法 :构建表达质粒 p E T22b + / gA PN ,在原核表达系统大肠杆菌中表达并纯化重组脂联素球状区 gA PN 蛋 白。用抗 A PN 单克隆抗体 MAB 10651 包被微孔板 ,10 %小牛血清作为封闭液 ,针对 A PN 不同抗原表位的单克隆抗体 MAB 1065 生物 素化后作为标记抗体 ,联合生物素 - 亲和素信号放大系统 , 以gA PN 重组蛋白为标准品绘制标准曲线 , 以准确性 、特异性 、重复 性 、回收率试验和方法对比试验评价 EL ISA 方法 。检测 16 1 例冠心病患者血清 A PN 水平并结合冠状动脉造影结果和 Gen sini 积分系统 ,探讨血清 A PN 水平与冠心病的关系 。结果 :利用基因克隆技术成功构建了p E T22b ( + ) / gA PN 质粒 ,获得了相对 ( ) 分子质量约 15 000 的重组 gA PN 蛋白,产量较高 1. 57 mg ,纯度 90 % ,并以此为标准品初步建立了检测人血清 A PN 的定 量 EL ISA 方法 。该法具有良好的准确性和重复性 ,灵敏度达 150 p g/ ml , 回收率为 9 1. 0 %～108 . 0 % ,与深圳依诺金生物科技 ( ) 有限公司进口分装的 EL ISA 试剂盒对照比较有 良好的相关性 r = 0 . 935 , P 0 . 00 1 。临床检测表明冠心病组血清 A PN 水平 ( ) 明显低于非冠心病组 P 0 . 0 1