花生壳总黄酮的超声分离提取及抗氧化性探究.pdfVIP

生物化学实验甲（甲－6班 ）论文集 2012－2013学年秋冬学期 花生壳总黄酮的超声分离提取及抗氧化性探究 张文心 詹乐晴 余璐 （2011 级 植物保护专业） 【摘要】利用乙醇作为提取溶剂，采用超声波提取法从花生壳中提取黄酮类物质。用颜色反 应进行鉴定，证明花生壳所含黄酮种类繁多。以芦丁为标准品，用紫外分光光度法，在波长 为 510nm处测定总黄酮含量。通过正交试验的设计分析，确定从花生壳中粗提黄酮类物质的 最佳工艺条件为：乙醇体积分数 55%，超声时间 40分钟，超声功率 450瓦，料液比花生壳: 乙醇 = 1:55，提取率为 45.21%，1.8mg/g。在 Fenton反应基础上，用固定时间法测定花生 壳黄酮对羟基自由基的清除效果，证明了黄酮的抗氧化性，且其添加量在一定范围内与清除 率呈正相关。若以花生 7000元/吨、含壳量 30%、黄酮 500元/g保守计算，1吨花生的壳黄 酮毛利润约 26.3万，有较好的经济效益。 【关键词】花生壳；黄酮；超声分离提取；正交实验；抗氧化性 【引言】花生（Arachishypogaea L ）是全球重要的四大油料作物（油菜、大豆、花生、芝 麻）之一，我国花生种植面积逐年递增，现产量已经超过 1500 万吨，居世界第一。目前对 花生的开发利用主要集中在花生仁、红衣和根，而花生壳大部分用做燃料或当作废渣弃去， 有限的开发利用主要为生产酱油、酿造白酒、加工饲料、栽培食用菌、制造复合板材等，但 附加值低，甚至会造成新的环境污染，直接影响了花生的综合利用价值。 花生壳除含有大量纤维素、木质素外，还含有蛋白质、脂肪、矿物质和以木犀草素为主 的黄酮类化合物等营养成分。黄酮类化合物是植物化学及医药保健领域研究的热点之一，具 有抗氧化、抗菌、抗病毒、降血脂以及雌激素样活性等生理功能。若能将花生壳中黄酮类化 合物等活性成分提取出来用于医疗、食品、化妆品等领域，可以变废为宝，对于提高花生的 经济效益，充分利用花生资源和保护环境都有着重要的现实意义。 本实验以生花生壳为实验材料，利用乙醇作为提取溶剂，采取超声波提取法从花生壳中 提取黄酮类物质。超声波技术用于天然活性成分的提取具有明显的优势，其产生的强烈振动、 空化效应和搅拌作用等可以加速活性成分进入溶剂，提高提取率，有效缩短提取时间。以芦 丁为标准品，用紫外分光光度法测定总黄酮含量，通过颜色反应鉴定提取的黄酮。设计正交 试验，考察乙醇浓度、超声时间、超声功率、料液比 4 个因素对花生壳黄酮提取率的影响， 探究粗提黄酮的最佳工艺。参照 Fenton 反应建立羟基自由基产生体系，用固定时间法测定 花生壳黄酮对羟基自由基的清除效果，以探究黄酮的抗氧化性质。 1. 实验材料和方法 1.1 实验材料 10 张文心，等：花生壳总黄酮的超声分离提取及抗氧化性探究 1.1.1 材料 生花生壳； 1.1.2 试剂 芦丁标准品（芸香叶苷）；乙醇溶液(体积分数40%、50%、60%、70%、80%)； 5% 亚硝 酸钠溶液； 10% 硝酸铝溶液； 4% 氢氧化钠溶液； 1% 三氯化铝乙醇溶液：称取 1.8g 三氯 化铝晶体（AlCl ·6HO），加无水乙醇溶解后，定容至 100mL；浓氨水； 7.5mmol/L 邻二氮 3 2 菲溶液； 5mmol/L PBS 缓冲溶液（pH7.4）：取 1mL 0.5mol/L PBS 贮藏液，用去离子水稀 释至 100mL； 7.5mmol/L硫酸亚铁溶液：称取 0.5213g 硫酸亚铁晶体（FeSO ·7HO），加去 4 2 离子水溶解后，定容至 250mL。临用前配制； 0.1%过氧化氢：取 0.83mL 30%过氧化氢，用 去离子水稀释至 250mL 1.1.3 仪器 超声细胞粉碎机，紫外可见分光光度计，电子分析天平，电热恒温水浴箱（37℃），烘 箱，紫外线灯，高速台式离心机，九阳调理机，毛细管，电吹风，