華人丙二酮四氫喋呤合成酶基因之分子遺傳學研究.pdfVIP

罕見疾病基金會第二屆博碩士獎助論文摘要 國立陽明大學遺傳學研究所碩士論文 華人丙二酮四氫喋呤合成酶基因之分子遺傳學研究 邱延慧 論文摘要 丙二酮四氫喋呤合成酶 (6-pyruvoyl-tetrahydroptetin synthase; PTPS, EC 4.6.1.10) 為由GTP 合成四氫生喋呤 (tetrahydrobiopterin, BH4) 反應的第二個 酵素，而 BH4 為苯丙胺酸羥化酶 (phenylalanine hydroxylase, phenylalanine-4-monooxygenase; EC 1.14.16.1) 合成酪胺酸、酪胺酸羥化酶 (tyrosine-3-hydroxylase, EC 1.14.16.2) 合成多巴胺 (dopamine) 以及色胺酸羥 化酶 (tryptophan-5-hydroxylase, EC 1.14.16.4) 合成5-羥色胺 (serotonin) 反 應所需的輔酶。因此若BH4 的合成發生障礙，不僅苯丙胺酸代謝受阻導致高 苯丙胺酸血症，也會因酪胺酸與色胺酸無法合成 dopamine 及serotonin 等神 經傳導物質，而出現嚴重的神經症狀，故BH4 缺乏型高苯丙胺酸血症患者需 要服用 BH4 並補充神經傳導物質，才能有效治療。PTPS 缺乏型高苯丙胺酸 血症為體染色體隱性遺傳，是BH4 缺乏型高苯丙胺酸血症最常見的一種。台 灣地區的高苯丙胺酸血症發生率估計在 1/30,000~1/40,000 之間， BH4 缺乏型 約占30%左右。 本實驗室在華人PTS 基因上的突變曾發現73CG 、155AG 、166GA 、 200CT 、209TA 、226CT 、259CT 、286GA 、317CT 、430GC 、IVS3+1GA 等11 種點突變及 116-119 del 和 169-171 del 二種核苷酸刪除。其中155AG I 和259CT 二種點突變在華人PTS mutant allele 中分別占28.4% 及39.2% ， 顯示 155AG 和259CT 為華人常見的PTS 基因上的突變，同時發現華人常 見155AG 的突變於中國南方mutant alleles 佔95% ，而在中國北方只佔4.8% (1/21) ，因此推論155AG是中國南方特有的突變。本研究延續以前的實驗， 分析 16 個 PTS mutant alleles ，除了發現三種在中國族群中常見的點突變 155AG (Asn52Ser) 、259CT (Pro87Ser) 以及286GA (Asp96Asn) ，以及在 日本患者發現曾見於文獻報導的243GA (del exon 4) 核酸改變之外，實驗中 亦發現IVS1-291 AG 及120TG (Phe40Leu) 二種點突變，之前未見於文獻 報導。進一步以反轉錄聚合酶鏈反應分析IVS1-291AG 改變對RNA 剪接的 影響時，發現IVS1-291AG 的改變可能會造成mRNA 保留一段intron 1 中長 79bp 的序列，轉錄出的蛋白質自第28 個胺基酸序列即與正常酶胺基酸序列 不同，且全長只含34 個胺基酸序列，推測無法合成完整的PTPS 酶，造成功 能上的缺陷。分析 120TG 突變對酶活性的影響則是利用定點突變法將 120TG 點突變引入含正常PTS cDNA 的pcDNA 3 質體序列，並送入哺乳類 細胞COS-1 中表現，研究結果發現含120TG 突變造成PTPS 酵素活性降至 正常之0.3% ，證實120TG 變化為造成PTPS 酶缺乏的突變。 為分析155AG 、259CT 以及286GA 在族群中的分布，實驗室曾篩選 到含PTS 基因之BAC 殖株 321H15 以尋找PTS 基因附近高多型性的基因標 誌。本實驗繼續進行321H15 之定序，得到全長85,084bp 的嵌入序列，且每 個核苷酸都達到phred Q40 的條件，序列錯誤率0.01% 。PTS 基因的起