米曲霉碱性蛋白酶基因的前导区对其在毕赤酵母中表达的必要性.pdfVIP

维普资讯 上 海 交通 大 学 学。报 (农 业科 学版) Vo1．26 No．3 第 26卷 第 3期 2008年 6月 JOURNALOFSHANGHAIJIAOTONGUNIVERSITY(AGRICULTURALSCIENCE) Jun．2008 文章编号：1671—9964(2008)03-0237-05 米曲霉碱性蛋白酶基因的前导区 对其在毕赤酵母中表达的必要性 郭继平 ，马 光 ，马 莺 f1．哈尔滨工业大学食品科学与工程学院，哈尔滨 150086；2．东北林业大学 生命科学学院，哈尔滨 150040) 摘 要：为探讨前导区对米曲霉碱性蛋 白酶基因在毕赤酵母中表达的必要性，本试验首先将米曲霉碱性蛋白酶的成熟肽编码 基因(咖-m)和表达载体pPIC9K双酶切后连接，得到重组表达载体pPIC9Ka／p／—m。然后静其线性化后电转化毕赤酵母GS115， 筛选 阳性转化子进行甲醇诱导表达，并进行 SDS—PAGE分析和碱性蛋白酶活力测定，同时在转录水平上对 目的基因进行 了 NoRh。mbl。t检测。将得到的结果与以前研究中得到的带有前导区的米曲霉碱性蛋白酶成熟肽基因在毕赤酵母 中的表达结果 进行对比 结果表明：如果没有前导区，米曲霉碱性蛋白酶成熟肽基因在毕赤酵母 中表达，无论在胞 内和胞外均检测不到 目的 蛋白 由此可见，米曲霉碱性蛋白酶基因在毕赤酵母中表达时必须有前导区的参与。 关键词：米曲霉碱性蛋白酶基因；前导区；毕赤酵母；异源表达 ^ 、 中图分类号：Q786 文献标识码：A EffectofItsPro-peptideS一equence0nE_’一xpressi●onOrJ-■ AspergillusoryzaeAlkalineProteaseGeneinPichiapastoris GUO嚣一pn窖，MAGuang~,MAYin窖 (1．CollegeofFoodScienceandEngineering，HarbinInstituteofTechnology，Harbin150090，China； 2．CollegeofLifeScience，NortheastForestUniversity，Harbin150040，China) Abstract：Tostudytheessentialityofitspro-peptidesequencewhenAspergiIIusoryzaealkalineprotease(却)genewasexpressedin Pichiapastoris，htecDNA encodingmatureproteinofalkalineproteasefrom A．oryzaewithoutpro—peptidesequencewasclonedinto htevectorpPIC9K．ThenhtdrecombinantplasmidspPIC9K／ap／—m werelinearizedandtransformedinto只 pastorisGSl15competent cells．Afterhtepositivertansfomr antswereinducedbymethano1．theanalysisofSDSandalkalineproteaseactivitywereca卜 riedout．Besides，Northernblotwasusedtod