蛋白膜伏安法研究进展.pdfVIP

第 37卷 分析化学 ( FENX I HUAXU E) 　评述与进展 第 3期 　　　　　　　 　　　　 　　　 　　　　　　　　 2009年 3月 Ch inese Jou rnal of A nalytical Chem istry 46 1～465 蛋白膜伏安法研究进展 张会娜 　郭智勇 　盖盼盼 (宁波大学材料科学与化学工程学院 , 宁波市新型功能材料及其制备科学实验室 —省部共建国家重点实验室培育基地 ,宁波 3 152 11) 摘 　要 　蛋白膜伏安法可全面研究蛋白质的电化学行为 ,包括内部电子传递 、界面电子传递 、耦合的质子传 递 、酶催化动力学与直接电化学 、外界物质介入的影响等 。本文就其原理 、方法 、应用 、存在的问题进行了综 述 ,引用文献 49篇 。 关键词 　蛋白膜伏安法 ,蛋白质 ,酶 , 电化学 ,评述 1　引　言 蛋白质是所有生命活动的载体和功能执行者 ,也是极为重要而又有限的生物战略资源 ,其表达 、修 饰 、定位 、结构 、功能及其相互作用方式等在很大程度上取决于其电化学行为 。当今蛋白质研究的几个 热点问题如 :氧化还原酶的作用机理 、蛋白质药物开发 、蛋白质分子电子器件开发 、蛋白质变性的自由基 机理等 ,无一不与蛋白质分子内外部的电子传递行为有关 。然而 ,可以直接研究的方法并不多 ,这主要 是因为 : 电化学活性基团通常被多肽链包裹而与电极表面距离较大 ,难于进行电子传递 ;分子中电子传 递通道的存在与位置及表面电荷分布的均匀性存在障碍 。因此 ,采用适当方法在电极表面固定蛋白质 , 使其保持生物活性并具有良好取向 ,是蛋白质电化学研究的关键 。在此类研究中 ,较为成功的是牛津大 ( ) [ 1, 2 ] 学 A rm strong研究组于 1990年代中后期建立的蛋白膜伏安法 p rotein film vo ltamm etry, PFV 。该方 法已受到国外同行的重视并采用 [ 3～5 ] , 国内目前的相关工作不多 [ 1, 2 , 6 ] 。本文就此作一综述 。 2　原理和方法 PFV 将微量氧化还原蛋白质以单层或亚单层形式固载于界面友好的电极表面 ,施加电位扰动或催 化物质 ,用电极充当电子的给予体或接受体 ,可导致电子传入 、传出蛋白质或在其内部迁移 , 以电流形式 记录这些电子迁移行为与电位 、时间等参数的关系 ,可获得大量信息 ,如 :蛋白质内部的电子传递机理与 速率 、蛋白质与电极间的界面电化学 、耦合的质子传递行为 、酶与基质间的电子传递行为 、蛋白质的活性 位点与离子通道 、外界物质介入导致的蛋白质构象重组及其所需能量等 [ 7, 8 ] 。优点在于 [ 8～10 ] : 固载蛋白 质可消除缓慢的、不可重现的蛋白质扩散所带来的复杂性 ;类似光谱的尖锐伏安信号有利于识别特定的 氧化还原中心 ;可在较宽的范围内对蛋白质的电活性中心施加快速精确的电位控制 ; “交互式 ”的实验 过程使得反应可以同时被驱动和检测 ;可同时获得热力学和动力学信息 ;蛋白样品用量很少 ,且由于酶 的特异性 ,灵敏度极高 ;无底物时可观察发生在蛋白质酶氧化还原中心的电子传递过程 , 引入底物后则 可从催化峰中得出酶催化的动力学过程等 。 ( ) 三电极的电极系统 :饱和甘汞电极 或 A g/A gC l 电极 为参比电极 ; 铂丝为对电极 ;棱面热解石墨电 ( ) [ 11 ] [ 12 ] 极 edge p lane p yro l