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六联组氨酸标记蛋白 高水平表达纯化手册
(A handbook for high-level expression and purification of 6×His-tagged proteins)
第五版
二零零三年六月
QIAGEN 公司
目录
试剂盒目录 7
贮存条件 8
技术辅助设备 9
产品使用限制条件 9
产品保证书及赔偿担保 9
安全信息 10
序论及总体指导方针 11
QIAexpress 系统 15
QIAexpress pQE 载体 15
QIAexpress pQE-TriSystem 载体在大肠杆菌细胞，哺乳动物细胞及昆虫细胞中的表达
16
pREP4 质粒的常规表达 16
大肠杆菌宿主菌系 17
组蛋白标记 18
Ni-NTA 技术 18
Ni-NTA 色谱填料 19
克隆 21
选择一个 QIAexpress 构造21
挑选将要使用的重组体蛋白和 pQE 载体22
蛋白质分子量要求 22
密码子用法 23
内部初始位点 23
无效率翻译 23
表达产物 23
克隆操作程序及载体图谱24
使用 pQE-30 UA 直接克隆 PCR 片段操作程序24
UA 克隆 常见问题处理 28
pQE 载体使用限制性内切酶识别序列克隆操作程序 -29
制备 pQE 表达结构 29
pQE 质粒的繁殖及构造 35
连接、转化、及筛选 36
2
六联组氨酸标记整和在其他载体上 37
PCR 诱变作用插入六联组氨酸标记 38
大肠杆菌转化 39
转化子分析 41
克隆实验设计方案
实验设计一：pQE-30 UA 连接
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