不同品种肉兔肌肉Myostain和Myogenin基因表达水平及其屠宰性状的关联分析.pdfVIP

水平及其与屠宰性状的关联分析 邝良德 谢晓红 雷 岷 李丛艳 任永军 郑 洁 张翔宇 郭志强 张翠霞 杨 超 李 勤 (四川省畜牧科学研究院，四川成都610066) 摘 要 表达水平差异及其与屠宰性状的关联性，本试验采用实时荧光定量PcR方法比较了齐卡巨型白兔和加利福 MSTN基因表达量极显著低于加利福尼亚兔，而MyoG基因表达量极显著高于加利福尼亚兔。相关分析表 关联。 关键词兔；肌肉生长抑制素；肌细胞生成素；肉质 响骨骼肌生长发育的抑制因子，主要作用是抑制成肌细胞的增生与分化。在动物肌肉发生萎缩时，MSTN基 因的表达水平则显著升高。而在比利时蓝牛和皮埃蒙特牛品种上的研究表明，该基因发生突变时可导致双 所有骨骼肌成肌细胞增殖分化的所有时期均有表达，是促进骨骼肌发育的一种调控因子。研究表明，MyoG 基因与出生时的肌纤维数目是密切相关的，而肌纤维的数目决定了肌肉生长的最大能力。目前关于家兔生 长肉质性状形成的分子遗传学基础尤其是基因表达方面的研究鲜有报道。因此，本文以齐卡巨型白兔和加 利福尼亚兔为研究对象，利用实时荧光定量RT—PCR技术，对出生后84日龄这两个品种肉兔背最长肌 性。初步揭示不同品种肉兔生长肉质性状形成的分子遗传学基础，以期为优质肉兔新品系的选育提供基础 资料。 1 材料 1．1 实验动物和样品的采集 础研究项目(2012JY0127)；四川省公益性科研院所基本科研业务费项目(SASA2013A07) 作者简介：邝良德(1983一)，男，汉族，助理研究员，硕士，邮箱：h印pyboy5851258@163．com。 已发表：《黑龙江畜牧兽医》，2014(3) ． 165 四川省畜牧兽医学会2014年学术年会 研究院种兔场，在相同饲养管理条件下喂养，记录其生长发育性能。在84日龄时，禁止饲喂12h后，每个品 种随机选取8只(公母各半)屠宰，测定其屠宰性状，并从左侧胴体采集与最后肋骨水平相邻的背最长肌两 份，一份迅速放人液氮中保存，另一份置于一20℃保存备用。 1．2主要仪器及试剂 Pae 电动匀浆器(瑞士P01ytronPrl200E)、PoWer 冻离心机、电子天平(沈阳龙腾ES20K一1)、英国Biochrom公司的wPA Doc 量PCR仪(美国Bio—Rad)、Versa Ex 国Invitrogen)、反转录试剂盒(加拿大Fe珊ents)、SYBR暑PremixTaq1M(TaKaRa，中国)等，引物由生工生 物工程(上海)有限公司合成。 2 方法 2．1 RNA的提取 FirststrandcDNA 污染。用琼脂糖凝胶电泳和分光光度法检测RNA的质量。然后利用RevenAidTM synthesis Kit(Fe珊ents)反转录试剂盒合成单链cDNA。 2．2 实时荧光定量PCR分析目的基因 利用实时荧光定量PcR方法分析不同品种家兔背最长肌中目的基因和内参基因(3一磷酸甘油醛脱氢 Premier 酶，GAPDH)的mRNA水平(表1)。利用蹦mer Ex 1M(2 Taq 仪(美国Bio—Rad)上进行。PcR条件如下：94℃908；95℃15s，引物退火温度(表1)20s，43个循环； 72℃15 s。每个样品做3次重复。本实验的扩增效率为95％一105％，线性关系符合要求。标准曲线用纯 化的质粒制作。所得到的ct值用2。A们‘方法计算。目的基因的表达水平通过内参基因GAPDH进行校正。 表1 实时荧光RT—PCR引物信息 2．3 统计分析