差异显示法分析不同生长环境中造血干_祖细胞基因表达第研究.pdfVIP

中国生物工程杂志 　Ch ina B iotechno logy, 2006, 26 ( 1) : 11～14 差异显示法分析不同生长环境中 造血干 /祖细胞基因表达的研究 李群良　刘启威 　蔡海波 　谭文松 (华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室 　上海 　200237) 摘要 　目的: 对比分析不同生长环境中的脐血 CD 34 + 造血干 /祖细胞基因表达变化 。方法 : 采用 静态和动态培养系统培养脐血单个核细胞 , 1周后收获 CD 34 + 造血干 /祖细胞 , 提取总 RNA , 用 差异显示法对比分析在不同生长环境中造血干 /祖细胞基因表达的差异 。结果 : 在所使用的差异 显示条件下 ,得到 30个差异表达基因片段 ,其中一个差异表达片段为 RAN 基因 ,该基因属于 RA S 癌基因家族 ,可能与造血细胞增殖有关 。结论 : 不同生长环境影响 CD 34 + 造血干 /祖细胞的基因 表达 ,这些差异表达的基因可为优化体外培养环境 ,扩增造血细胞提供分子基础 。 关键词 　脐血 　CD 34 + 造血干 /祖细胞 　培养环境 　差异显示 中图分类号 　Q786 　　脐血是造血干 /祖细胞的一种重要来源 ,脐血干细 1　材料与方法 胞移植已被用于重建造血功能以治疗血液疾病 [ 1 ] 。然 而由于单份脐血所含造血干细胞数量少的缺陷 , 限制 1. 1　培养基与细胞因子 了其临床应用范围, 因此体外扩增可能是解决该局限 　　基本培养基为 IMDM ( GIBCO ) , 配制时加入 3g/L N aHCO 、2mmol/m l 谷氨酰胺 、10 - 4 mol/L 巯基 乙醇 以 性的一种有效手段 。目前 ,静态和动态培养系统已被 3 及 10 - 5 mol/L 氢化 可 的松 。使 用 时添加 胎 牛血清 广泛用于造血干 /祖细胞的体外扩增 。然而有报道指 ( ) ( ) ( ) ( 20% 、SCF 50ng/m l 、IL 3 5ng/m l 和 IL 6 10ng/ 出体外培养虽然能在一定程度上增加造血干 /祖细胞 ) m l 等 。 数量 ,但是扩增的造血细胞却表现出受损的生物学功 1. 2　细胞培养 能 ,如归巢和植入能力下降等 ,这表明体外培养环境对 ( ) 　　用淋巴细胞分离液 1. 077m g /m l 分离脐血单个核 造血干细胞的生物学活性具有重要影响 [ 2 , 3 ] 。另外 ,在 6 ( )