基因芯片技术在哺乳动物细胞培养工程中的应用.pdfVIP

《生命的化学》2010年30卷4期 · 636 · ● CHEMISTRY OF LIFE 2010，30(4) 文章编号: 1000-1336(2010)04-0636-04 基因芯片技术在哺乳动物细胞培养工程中的应用 杨喻晓 周兴军 华北制药集团新药研究开发有限责任公司微生物药物国家工程研究中心/ 河北省工业微生物代谢工程技术研究中心，石家庄 050015 摘要：近年来，以哺乳动物细胞为宿主生产的重组蛋白药物大大促进了人类的健康，因此迫切需要寻找高效表达 高质量蛋白药物的细胞株。基因组学技术的出现促进了该研究的发展，尽管这方面研究还处于起步阶段。基因芯 片技术作为基因组学技术的重要组成部分，主要在转录水平研究细胞培养。本文就基因芯片技术在细胞培养工程 中的应用进行了综述。 关键词：基因芯片技术；哺乳动物细胞；细胞培养工程；重组蛋白药物；基因组学技术 中图分类号：Q291 [4] 基于哺乳动物细胞的生物技术在病毒疫苗、蛋 超高表达 。第二个决定性因素包括细胞培养过程 白质诊断治疗药物中的应用将近有半个世纪。目前 变量，如细胞培养基组成，温度和pH值。例如降低 体外培养细胞生产重组蛋白制品每年销售额约700 温度可以促进细胞从生长期到表达期的转变从而提 [1] [5,6] 亿美元 ，且每年以超过20%的速度增长。哺乳动 高细胞表达水平 。这些变量的过程优化可以使细 物细胞是生产重组蛋白类药物的主要宿主细胞，主 胞表达提高一个数量级以上。虽然通过过程优化提 要来自人(如W138，MRC5，HK293)、狗(如MDCK)、 高了细胞的蛋白质表达，但其中的机理即与哺乳动 非洲绿猴(Vero)和啮齿动物(包括中国仓鼠细胞CHO， 物细胞系高表达相关的分子和生理因素并没有被很 [2] 好的认识，尤其在系统水平上。尽管缺少这些知识， 金仓鼠细胞BHK和小鼠细胞NS0,Sp2/0,mouse L)。 这些宿主细胞系通过转染、克隆筛选，得到的细胞 仍有一些明确的细胞途径和特性被认为对提高细胞 株分泌重组蛋白产物水平可以达到甚至超过体内细 生长、凋亡和糖基化等很重要，这些途径是细胞培 [7,8] 胞。尽管细胞表达量有了很大的提高，但重组蛋白 养工程中的主要靶点 。 药物产业化仍然需要花费上亿美元，这就要求构建具 高通量基因组学技术的出现使我们具备了系统 有更高表达水平的细胞株和提高表达的细胞工程技术。 研究细胞分子和生理学的能力，并期望用于揭示与 [3] 高表达相关的关键部件。然而，这些技术到现在还 目前提高细胞株表达水平有两种策略 ：第一 最具决定性因素是生产细胞系。生产细胞系的发展 没在细胞培养工程中得到广泛应用。在目前所有研 遵循当前的筛选策略，通过筛选分离获得少量的高 究细胞分子和生理学的技术中，基因芯片技术是最 表达克隆。在笔者所在企业抗体药物国家重点实验 有效的，该技术能够对所有基因进行检测。基因芯 室中，通过在结构基因或基因启动子的5’ 和/ 或3’ 片技术能够直接在转录水平研究由环境因素或基因 端加入天然1.006 kb或人工合成0.733 kb的富含GC 操