两种试验方法结合增加实验猴结核病检出率的探讨.pdfVIP

实验动物 第七届中南地区实验动物科技交流会论文汇编 猴结核病是由结核分枝杆菌引起的，以在猴的多种组织器官中形成结核结节性肉芽肿和干酪 样、钙化结节病灶为特征的一种人兽共患性慢性传染病，是我国检疫法和国际贸易检疫必检项目， 结核菌素变态反应试验为指定方法n卫3，但其检出率和准确率并不理想。近几年研究发现血清学酶 联免疫试验(ELISA)对检测结核病后期或严重时期检疫结核病敏感性和准确度比较高，是变态 试验有效的补充。现将以上两种结核病检疫方法作一比较。 l 变态反应试验 变态反应试验的原理是利用动物感染或曾经感染过结核分枝杆菌机体免疫细胞被致敏，当机 体再次受到相同或类似的物质刺激时，致敏的免疫细胞(T、B细胞和巨噬细胞等)会迅速增殖， 汇集到受到刺激的部位，巨噬细胞吞噬刺激原并同时释放炎性因子，致使该部位产生红肿热痛为 特征的炎症∞。。猴变态反应试验使用旧结核菌素，在上眼睑皮下注射2500IU／只，在24、48、72 小时观察结果是否产生炎症来判断结核病阴阳性H。。 结核菌素变态反应试验操作对实验试剂和设施要求低。结核菌素已经商品化，对操作人员技 术水平要求不高，试验过程简单，结果直观易于判断，适合原产地检疫和口岸检疫。变态反应试 验在长期的实践中被证明是结核病检疫可靠的方法，广泛被各国采用，至今仍是国际结核病检疫 通用方法。但变态反应试验有以下几个缺点：一是耗时长、劳动量大。．二是非特异性反应导致 假阳性。与结核分枝杆菌抗原性相似的非典型分枝杆菌是非致病菌，凡是感染过此类分枝杆菌的 动物也能对结核菌素产生变态反应哺’“，三是过敏体质以及不良操作也能产生类似阳性反应。四是 结核病检出率不高，报道普遍只有60～75％…，其首要原因是机体细胞免疫活性低下时，免疫细胞 对结核菌素反应性减弱以致不能被检出，在某些免疫抑制病(如猴AIDS)和寄生虫病，或是使用 过免疫抑制药物时都会产生假阴性从而降低了检出率哺’91。所以，变态反应试验阴性结果表明三 种情况：一是机体未感染结核杆菌；二是结核杆病病情恶化中；三是弱体质或患有使机体免疫机 能下降的其它疾病。可见变态试验检疫结核病的检出率是有限的，若单独应用可能造成部分结核 病个体的假阴性结果。 2 酶联免疫试验(ELISA) ELISA检结核病的原理是用纯化的结核菌素(PPD)包被酶标板，加入稀释的待检猴血清，血 清中如果有抗结核杆菌抗体，就能与吸附在酶标孔内的PPD特异性地结合，洗涤后加入辣根过氧 化物酶标记的第二抗体，与孔内的结核杆菌抗体特异性地结合，洗涤后加入显色指示剂，孔内的 辣根过氧化物酶使显色剂显色，最后根据样品的oD值(P)与阴性对照的0D值(N)的比值即P／N 体获得成功。抗原PPD是从菌体裂解液纯化而来，包含有多种抗原成分，常见的有脂阿拉伯甘露 聚糖(LAM)、抗原60(A60)、结核杆菌糖脂(TBGL)、38x103蛋白、抗原85复合体、ESAT一6 和CFPl0等。单独使用其中一种抗原检测敏感性只有70％左右，多克隆抗原“鸡尾酒”法的应用 其敏感性分别为70．1％、67．5％、70．9％，特异性分别为92．5％、97．5％、95％。三种抗原联合检测， 其敏感度提高到91．5％，特异性降为87．5％。 结核病ELISA检测继承了酶联免疫反应的优势，即可同时检测大批量样品，且试验时间短， 劳动量小，方便在实验室开展工作，对加快检疫工作效率有重大现实意义。由于结核病的细胞免 疫与体液免疫相分离的特殊性，当结核杆菌侵入机体，如果机体免疫力强，菌体被免疫细胞消灭 或仅局限在局部开成瘢痕或钙化灶，机体不产生或仅产生低水平的循环抗体，ELISA检测多呈阴 性反应，此期ELISA的应用价值非常有限。当机体细胞免疫力下降，结核杆菌大量繁殖或钙化组 织中的杆菌重新侵入机体，病情开始恶化，抗结核杆菌抗体大量产生，机体进入体液免疫阶段， 结核菌的IgG抗体的水平与病变程度呈正相关，此时检测血清中IgG抗体对于疾病的诊断有重要 意义n¨。这个阶段机体对外具有高度的传染性，是个高危时期，所以对ELISA阳性的个体应立即 扑杀，并对尸体焚烧深埋处理。ELISA检测结果是阴性表明三种情况：一是未感染结核杆菌；二 161 第七届中南地区实验动物科技交流会论文汇编 实验动物 是感染初期的细胞免疫阶段；三是曾经感