环扎法致大鼠脊髓损伤模型减压时机F嬲的表达和神经功能恢复.pdfVIP

10 安徽省医学会骨科学第十三次学术会议论文汇编 仪检测，n盯-a组和空白组比较，髓核细胞早期凋亡率较有显著性差异(P0．01)，与之相符合。 成，糖蛋白合成，氨基多糖的合成，以及蛋白质的合成，同时它有干扰和抑制Fas系统作用。本实验 的前期研究已证明hIGF．1能抑制ILlp无血清培养诱导的髓核细胞凋亡，经流式细胞仪检测凋亡率明 显下降。Gmber等分离人纤维环细胞进行培养，通过降低培养基中的血清浓度来诱发纤维环细胞凋 并发现IGF．1对抗细胞凋亡的效应与其剂量呈正相关，认为其机制是调节Bcl．2仍aX平衡。黄宗强，刘 尚礼等采用Cre．LoXP同源重组系统成功构建出携带人胰岛素样生长因子．1(humaninsul江like朗)wm fa曲咿1趟GF．1)目的基因的重组腺病毒，为基因治疗椎问盘退变提供了很大帮助。江海良等用携带 人胰岛素样生长因子I基因的重组腺病毒体外转导培养关节软骨细胞发现兔关节软骨细胞可被 Ad．hIGF．1有效转导并表达目的基因，进而较为稳定地产生内源性的胰岛素样生长因子I，调节关节 软骨细胞的表型，抑制去分化，并进而促进II型胶原和蛋白多糖的合成。其为本实验的进行提供了 理论依据。本实验的研究结果显示：Ad-hIGF．1作用于髓核细胞培养后，能抑制n师．al％血清培养 诱导的髓核细胞凋亡，经流式细胞仪检测凋亡率明显下降，证实了Ad-hIGF．1可抑制TN_F．a1％血清 培养诱导的髓核细胞凋亡。 本实验虽然已经证实，Ad．hIGF．1对TNF．Ⅱ诱导的髓核细胞凋亡有抑制作用，但仍然存在一些问 题需要进一步研究：1．尚未找到一种理想的能在时间和空间上对基因表达进行控制的调控系统；2． Ad-IGF．1产生抗凋亡作用又不引起副反应的最佳剂量；3．采用何种方式将IGF．1导入到髓核部位； 4．外源基因进入人体，长期以后会不会有副作用；5．大量病毒进入人体后引起的毒性和免疫原性反 应等。基因载体治疗DDD是人们对疾病认识水平的提高，一种很好的治疗构想，但是目前还有很多 不确定因素需要进一步的探索。 基金项目：安徽省高校省级自然科学研究重点项目I：陀01lA204 环扎法致大鼠脊髓损伤模型减压时机与F嬲的表达和神经功能恢复 李全辉1徐祝军2+谢加兵2杨民2顾文浩2聂虎2 (皖南医学院弋矶山医院骨科) 摘要目的通过环扎法致大鼠脊髓损伤模型，研究不同手术时机减压后细胞调亡基因的相关变化，探讨F舔蛋白表 达在脊髓损伤减压后的表达规律和意义。方法SD大鼠loo只。采用环扎法造成脊髓静态压迫模型(实验组)75 伤脊髓进行组织学、分子病理学研究，以及BBB和斜板分进行活体神经功能评价。结果在脊髓损伤后l天加和 1rI舭L均有表达，在3天时达高峰，其中以未减压组最为严重。7天、14天、2l天表达逐渐减少。对照组很少表 达：神经功能恢复以8小时减压组最明显，优于72小时减压组和不减压组。F勰阳性细胞、细胞凋亡细胞数与神经 功能恢复存在线性关系。结论F勰可能在诱导脊髓损伤后神经细胞凋亡的过程中，发挥着重要用，推测可作为脊髓 损伤后一个可行性神经功能的验测指标，通过阻断F舔的表达可能为脊髓损伤治疗提供一种新方法。 关键词 脊髓损伤，动物模型手术时机FAS细胞调亡 cord 急性脊髓损伤(spinal 会带来了沉重的负担，并呈现年轻化趋势。脊髓损伤后，除创伤造成的直接损伤外，还广泛存在神 经细胞凋亡，这是继发性脊髓损伤的一个重要病理变化‘11。对ScI治疗的手术时机选择是目前研究的热 点之一，对于继发损伤的分子机制以及与预后的关系目前还不清楚。本文采用环扎法建立大鼠急性 安徽省医学会骨科学第十三次学术会议论文汇编 持续静态压迫脊髓损伤scI模型，考察减压治疗不同手术时机，与大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡相关 基因FaS表达和神经功能行为恢复关系，说明sCI继发神经损伤的分子机制，为ScI的治疗和基础研究 提供新的思路和方法。 l材料与方法 1．1试剂材料 即用型sABc试剂盒、Ⅳ心免疫组化试剂盒、细胞凋亡检测试剂盒购自武汉博士德 6．0、胃 生物工程有限公司。DAB显色试剂盒、0．0lMPBs(pH7．2．7．4)、0．0lM枸橼酸缓冲液(pH 蛋白酶消化液)购自北京中杉金桥生物有限公司。 1．2方法 1．2