2014-2015学年高二生物课件：第一部分实验二《微生物的培养和利用》课件6（浙科版选修1）[ 高考].pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * 实验2 分离以尿素为氮 源的微生物 尿素又称脲,是蛋白质的降解产物,哺乳动物的尿液中含有,植物不能直接吸收尿素,因此,大量尿素的存在对环境造成污染.有些细菌可产生脲酶,以尿素为氮源,脲酶可将尿素分解为氨,被植物吸收. 一、实验原理 用选择培养基可分离出以尿素为氮源的微生物，这些微生物可产生脲酶，脲酶可将尿素分解为能被植物吸收的氨，因此这类微生物具有一定的生态学价值。稀释涂布平板法统计土壤样品中含有的这种微生物的数目 细菌 尿素 NH3 中性 碱性 酚红颜色： 黄色 紫红色 稀释涂布平板法的原理 将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释程度的菌液分别涂布到固体培养基的表面，进行培养，以形成标准菌落 /programs/view/4GG6NWunN6w/ 二、实验目的: 使用以尿素为唯一氮源的培养基分离细菌(有脲酶) 通过指示剂（酚红）颜色的变化检知培养基pH的变化(脲酶催化的化学反应) 统计被检测的土壤中含有的以尿素为氮源的微生物的数量 三、实验中涉及到的一些问题： （一）哪些土壤中含有这种以尿素为氮源的微生物多？（选材的问题） （二）此实验用到的选择培养基必需含有哪些物质？ （三）可用什么指标认定不同土壤中选择出的微生物对尿素分解能力的高低？ （四）统计微生物的数量可用哪些方法？ 没硬化，腐殖质丰富的土壤 碳源、尿素、无机盐、水、酚红 培养基红色的深浅 稀释涂布平板法，显微镜直接记数法 四、操作步骤： ２、倒平板： ３、制备一定浓度梯度的细菌悬液： １g土壤＋９９ml无菌水，振荡，为１０２稀释液，依次制备１０３、１０４、１０５的土壤稀释液。 ４、稀释涂布分离法分离细菌 １、制备无菌的ＬＢ固体培养基和尿素固体培养基 ５、培养观察（倒置，３７度） 倒３个ＬＢ培养基，９个尿素固体培养基 （无菌，0.1ml，玻璃刮刀） 配制培养基 尿素培养基（1L） 葡萄糖 10g NaCl 4.8g K2HPO4 4.8g 琼脂 20g 酚红 0.01g 尿素 80g LB培养基（1L） 蛋白胨： 10g 酵母粉： 5g NaCl： 10g 琼脂： 20g 对照组 选择培养基 实验组 LB培养基是一种培养基的名称,生化分子实验中一般用该培养基来预培养菌种,使菌种成倍扩增,达到使用要求. 过滤灭菌后的尿素 倒平板 需要倒3个LB平板，9个尿素平板 LB(对照) 尿素 10-2 10-3 10-4 每个稀释度 1个LB对照平板 3个尿素平板(平行重复组) 配制菌悬液 1个99ml无菌水 2个9ml无菌水 得102, 103, 104的菌悬液 1g土壤 接种 取100ul菌悬液 涂布分离 涂布分离 涂布前后三角刮刀需要灼烧吗？ 涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？ 应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。 37℃倒置培养 按浓度捆成一摞 恒温37℃培养 防止冷凝水污染培养皿，防止其它细菌污染。 五、操作步骤：（学生做） ２、倒平板：倒２个ＬＢ培养基，２个尿素固体培养基 ３、制备一定浓度梯度的细菌悬液： １g土壤＋９９ml无菌水，振荡，为１０２稀释液，依次制备１０３、１０４（０.５＋４.５ml无菌水）的土壤稀释液。 ４、稀释涂布分离法分离细菌 １、制备无菌的ＬＢ固体培养基和尿素固体培养基 ５、培养观察（倒置，３７度） 10-4 、 10-3,、 10-2 1、为什么要用琼脂糖代替琼脂配置固体培养基 因为琼脂是未被纯化的混合物，内含一定量的含氮化合物。如果用琼脂固化培养基，会为细菌提供一定量的非尿素类氮源，这样会在尿素固体培养上产生大量以非尿素为氮源的细菌，不利于以尿素为氮源的细菌的筛选，故用纯化的琼脂糖而不用琼脂做固化剂 思考题： 2、有脲酶的细菌在生态稳态上起什么作用 土壤中的尿素在较高温度下会被水解成氨，氨