基于途径分析的L谷氨酸发酵条件优化.pdfVIP

基于途径分析的I厂谷氨酸发酵条件优化+ 杜 军1，刘 辉2，徐庆阳1，陈 宁1 2(中科院过程工程研究所，北京，100080) 1(天津科技大学生物工程学院，天津，300222) 摘 要 应用途径分析方法分析了黄色短杆菌GDK一9由葡萄稽发酵生产L-谷氨酸的途径，确定了L-谷氨酸合 成的理想途径和最大理论产率。通过比较途径分析所获得的反应模型，确定了口-酮戊二酸和柠檬酸是L-谷氨 酸合成途径的关键节点。在此基础上改变外界环境因子，强化L-谷氨酸生物合成途径中关键节点柠檬酸的代 谢流，减少副产物乳酸的生成，以提高L_谷氨酸产率。实验中采用脉冲流加补料方式，控制溶氧在10％左右， 生物素亚适量法生产工，谷氨酸产量达到136g／L。 关键词 L．谷氨酸。途径分析，黄色短杆菌 acid)是蛋白质的主要构 L-谷氨酸(L_glutamic 1 材料与方法 成成分。在医药、食品、人造制革、化妆品工业及农业 上具有广泛的用途[1]。目前国内发酵法生产L_谷氨1．1供试菌株 酸的产酸水平和糖酸转化率与国际同行业尚有较大 黄色短杆菌(B7．已祝6口f￡P一“优，z口口“优)GDK一9， 差距。针对氨基酸行业发酵生产现状，采用代谢工程 天津科技大学代谢工程研究室保藏菌种。 等方法，优化产业生产菌种和发酵工艺，使得菌种发 1．2培养基 酵的综合技术水平达到或超过国际先进水平，对提高 见参考文献‘51。 我国氨基酸产业的自主创新能力，提高国际竞争力具 1．3培养方法 有十分重要的现实意义。 1．3．1斜面活化培养 途径分析(pathwayanalysis)是代谢工程中用以 h。 32℃培养20～24 指导遗传操作的理论基础，是代谢网络分析的重要方 1．3．2种子培养 法之一[1~4]。途径分析研究对于指导谷氨酸棒杆菌 500mL三角瓶装液量20mL，9层纱布封口，于 发酵生产谷氨酸的菌种选育及过程控制具有重要意 旋转式摇床上(200r／min)32℃振荡培养8～10h。 义。实际上细胞内代谢网络可以由途径分析获得的 1．3．3 10L自控发酵罐分批发酵 基本反应模型的非负线性组合产生。在这些基本反 10 mL， L发酵罐中装液量6L，接种量600 应模型中有一个代表最高的产率和代谢流分布的理 32℃，通风比1：1，流加氨水控制pH在7．O，通过流 想载流途径。理想载流途径的构建开始于酶的确定、 加泡敌消泡。搅拌转速依据所需要求设定，发酵36 理论产率的计算和确定最优的代谢流分布，因此途径 h。 分析对于谷氨酸合成理想载流途径的构建具有重要 1．4分析方法 意义。 1．4．1()D值测定 基元模型分析是途径分析的重要工具之一。目 nm处用 发酵液稀释一定倍数后，在波长620 前已有许多基元模型分析成功应用的实例，如酿酒酵