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基于途径分析的L谷氨酸发酵条件优化.pdf
基于途径分析的I厂谷氨酸发酵条件优化+
杜 军1,刘 辉2,徐庆阳1,陈 宁1
2(中科院过程工程研究所,北京,100080)
1(天津科技大学生物工程学院,天津,300222)
摘 要 应用途径分析方法分析了黄色短杆菌GDK一9由葡萄稽发酵生产L-谷氨酸的途径,确定了L-谷氨酸合
成的理想途径和最大理论产率。通过比较途径分析所获得的反应模型,确定了口-酮戊二酸和柠檬酸是L-谷氨
酸合成途径的关键节点。在此基础上改变外界环境因子,强化L-谷氨酸生物合成途径中关键节点柠檬酸的代
谢流,减少副产物乳酸的生成,以提高L_谷氨酸产率。实验中采用脉冲流加补料方式,控制溶氧在10%左右,
生物素亚适量法生产工,谷氨酸产量达到136g/L。
关键词 L.谷氨酸。途径分析,黄色短杆菌
acid)是蛋白质的主要构
L-谷氨酸(L_glutamic
1 材料与方法
成成分。在医药、食品、人造制革、化妆品工业及农业
上具有广泛的用途[1]。目前国内发酵法生产L_谷氨1.1供试菌株
酸的产酸水平和糖酸转化率与国际同行业尚有较大 黄色短杆菌(B7.已祝6口f£P一“优,z口口“优)GDK一9,
差距。针对氨基酸行业发酵生产现状,采用代谢工程 天津科技大学代谢工程研究室保藏菌种。
等方法,优化产业生产菌种和发酵工艺,使得菌种发 1.2培养基
酵的综合技术水平达到或超过国际先进水平,对提高 见参考文献‘51。
我国氨基酸产业的自主创新能力,提高国际竞争力具 1.3培养方法
有十分重要的现实意义。 1.3.1斜面活化培养
途径分析(pathwayanalysis)是代谢工程中用以 h。
32℃培养20~24
指导遗传操作的理论基础,是代谢网络分析的重要方 1.3.2种子培养
法之一[1~4]。途径分析研究对于指导谷氨酸棒杆菌 500mL三角瓶装液量20mL,9层纱布封口,于
发酵生产谷氨酸的菌种选育及过程控制具有重要意
旋转式摇床上(200r/min)32℃振荡培养8~10h。
义。实际上细胞内代谢网络可以由途径分析获得的 1.3.3 10L自控发酵罐分批发酵
基本反应模型的非负线性组合产生。在这些基本反
10 mL,
L发酵罐中装液量6L,接种量600
应模型中有一个代表最高的产率和代谢流分布的理
32℃,通风比1:1,流加氨水控制pH在7.O,通过流
想载流途径。理想载流途径的构建开始于酶的确定、
加泡敌消泡。搅拌转速依据所需要求设定,发酵36
理论产率的计算和确定最优的代谢流分布,因此途径
h。
分析对于谷氨酸合成理想载流途径的构建具有重要
1.4分析方法
意义。
1.4.1()D值测定
基元模型分析是途径分析的重要工具之一。目
nm处用
发酵液稀释一定倍数后,在波长620
前已有许多基元模型分析成功应用的实例,如酿酒酵
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