甲基化对牛Igf-2r表达的影响与其在克隆牛发育中的作用.pdfVIP

动 物 学 研 究 2007, Oct. 28(5): 470 －476 CN 53-1040/Q ISSN 0254-5853 Zoological Research DNA 甲基化对牛Igf-2r 表达的影响及其 在克隆牛发育中的作用 * (上海交通大学附属儿童医院 医学遗传研究所,上海 200040) 摘要：目前认为克隆效率低的主要原因是供体核的不完全重编程导致发育过程中一些重要的基因异常表达。 运用 DNA 甲基化转移酶抑制剂5′-脱氧胞苷（5′-azacytidine，5′-aza ）处理MDBK细胞（牛肾上皮细胞），并通过实 时荧光定量PCR 方法对 Igf-2r 基因的表达进行了定量分析；在此基础上，应用亚硫酸盐甲基化测序法检测正常牛 及克隆牛脑、肺、心、肝组织 Igf-2r 印迹调控区DMR 2 （DNA differentially methylated region ，DMR ）及非印迹 调控区 3′-UTR （3′-untranslated region，UTR ）的DNA 甲基化水平。研究发现，5′-aza 处理 MDBK 细胞后，Igf-2r 基因的表达上调。正常牛各组织中 Igf-2r DMR 2 区的 DNA 甲基化程度差异较大，3′-UTR 区较稳定；与正常牛相 比，克隆牛DMR 2 区的甲基化程度变化较大，3′-UTR 区无显著性变化。结果表明，DNA 甲基化修饰影响Igf-2r 基因的表达。正常牛不同组织中 Igf-2r 基因 DMR 2 区的 DNA 甲基化程度不同，提示Igf-2r 基因的印迹调控方式 在不同组织中可能不同。克隆牛发育过程中，调控 Igf-2r 基因印迹的 DMR 2 表观结构被明显改变，而非印迹调控 区 3′-UTR 则无明显变化，提示Igf-2r 基因印迹调控区被破坏，很可能是导致克隆牛发育异常的一个重要原因。 关键词：Igf-2r ; 表观遗传; 克隆牛; DNA 甲基化; 基因印迹 中图分类号：Q34; Q523 文献标识码：A 文章编号：0254-5853-(2007)05-0470-07 Effect of DNA Methylation on Igf-2r Expression in the Development of Cloned Cattle * CAI Xia, LONG Jian-er (Shanghai Children’s Hospital, Institute of Medical Genetics, Shanghai Jiaotong University, Shanghai 200040, China) Abstract ：Epigenetic reprogramming has a crucial role in establishing nuclear totipotency in normal development and in cloned animals. In the current study, the method of real-time fluorescent quantitative PCR (FQ-PCR) was applied to detect Igf2r mRNA in Madin–Darby bovine kidney （MDBK ）cells