邻硝基苯基荧光酮分光光度法测定牛血清白蛋白.pdfVIP

第19卷第12期 武 汉 科 技 学 院 学 报 vol_19No．12 2006年 12月 JOURNALOFWUHANUNIVERSITYOFSCIENCEANDENGINEERING Dec．2006 邻硝基苯基荧光酮分光光度法测定牛血清白蛋白 顾 彦 ，王云峰2，朱圣姬2，黄应平2 (I三峡大学机械与材料学院，湖北 宜昌443002；。 2三峡大学AlanGMacdiarmid再生能源研究中心，湖北 宜昌443002) 摘 要：研究了邻硝基苯基荧光酮(D．NPF)分光光度法测定牛血清白蛋白(BSA)~二元反应条件。在pH； 2．0的HCI—NaAc缓冲溶液中，D．NPF与BSA作用形成结合物，依据BSA的加入量与体系吸光度增加 的线性关系，建立了操作简单，方便，灵敏度高测定BSA的新方法，拟定方法用于脑脊液蛋白的测定， 结果满意。 关键词：邻硝基苯基荧光酮。牛血清白蛋白，分光光度法 中图分类号：065 文献标识码：A 文章编号：1009--5160(2006)--0040--04 蛋白质研究对生命科学、生物化学、临床医学等都有十分重要的意义，通过对蛋白质的定性分析，可以了 解其结构与功能之间的关系，揭示生命现象的奥秘。而蛋白质的定量分析是生化、药物、食品及临床分析最常 涉及的内容，也是临床检验中诊断疾病及检查疾病治疗康复情况的重要指标，又是许多生化药物分离提纯和质 量检验中最常用的手段 。某些生命物质如酶、多肽、蛋 白质及蛋 白质激素的分离纯化更是离不开蛋白质的定量 测定。因此蛋白质的定量测定在生命科学、临床医学和化学研究中占有十分重要的地位…。 蛋白质的定量分析方法有很多，从最早的浊度法、凯氏定氮法，到目前研究最多、应用最广、操作较为简 便的吸光光度法、荧光光度法，还有新发展起来的共振瑞利散射法、高效液相色谱法 毛细管电泳分析法，这 些方法各有优点l2】。在光度法中，最新的方法是金属离子．染料结合法 】。苯基荧光酮类试剂是一种性能良好的 显色剂，已经广泛应用于某些高价金属及其它组分含量的定量分析f4】。其与金属离子形成的配合物可作为探针 试剂用于蛋白质的测定 7【们，但金属．有机染料应用于蛋白质的定性和定量方法为三元测定体系，体系复杂。干 扰较大。本文选用邻硝基苯基荧光酮 (D．NPF)为探针试剂通过试剂直接与蛋白质作用，在酸性条件下，不加表 面活性剂和金属离子，建立了测定蛋白质测定的新方法，方法简单 。灵敏度较高，应用于脑脊液蛋白的测定， 结果满意。 - 1实验方法 1．1主要仪器和试剂 U3010型紫外可见分光光度计(日本 日立)；756pc紫外可见分光光度计 (上海光谱有限公司)；PHs．3C型酸 度计 ；TB．85型超级恒温器；电光天平。 牛血清白蛋白 (BSA)(生化试剂，上海伯奥生物科技有限公司)：1．OxlO。。mol／L，用牛血清蛋白配制成水 溶液；邻硝基苯基荧光酮(D．NPF)(自己合成 )：1．Oxl0-3mol／L。用邻硝基苯基荧光酮配制成乙醇．水溶液；pH 缓冲溶液：pHI。3．5，用已配制好的1．0mol／LHCI溶液和 CH3COONa溶液按不同的体积混合，配制成缓冲溶液。 实验过程中用水均为去离子水，试剂均为分析纯。 l，2实验方法 收稿日期：2006．09．16 作者简介：顾彦 (1966．)，女，高级实验师。研究方向：分析化学． 基金项 目：湖北省青年杰出人才基金 (项目编号：5ABB030)；i峡大学重大科技项目(项目编号：2003C07) 第 l2期 顾 彦，等：邻硝基苯基荧光酮分光光度法测定牛血清白蛋白 4l 向10mL比色管中依次加人 1mLpH=2．0HC1．CH3COONa的缓冲溶液，0．3mL1．0xl0一mol!LD．NPF，0．3 mL1．0x10 mol／LBSA标准溶液，定容至5mL，摇匀 ，静置 10min后，于493nm处分别与试剂空白以水为参 比测定体系的吸光度。 2结果与讨论 2．1吸收曲线