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小鼠促卵泡素(FSH)酶联免疫吸附测定试剂盒
使用说明书
产品编号:E0830m
本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断!
预期应用
ELISA 法定量测定小鼠血清、血浆或其它相关生物液体中FSH 含量。
实验原理
用纯化的 FSH 抗体包被微孔板,制成固相载体,往微孔中依次加入标本或标准品、生物
素化的FSH 抗体、HRP 标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物(TMB)显色。TMB 在过氧化物酶
的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 FSH 呈
相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度( 值),计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制
1、 酶标板:一块(96 孔)
2、 标准品 (冻干品): 2 瓶,请临用前 15 分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至 1ml,盖
好后室温静置大约10 分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为 1 mIU/ml,然后做
系列倍比稀释 (注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成1mIU/ml,0.5 mIU/ml,
0.25 mIU/ml,0.125 mIU/ml,0.062 mIU/ml,0.031 mIU/ml,0.015 mIU/ml,样品稀释
液直接作为空白孔 0 mIU/ml。如配制0.5 mIU/ml 标准品:取0.5ml (不要少于0.5ml )
1 mIU/ml 的上述标准品加入含有0.5ml 样品稀释液的Eppendorf 管中,混匀即可,其余
浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
6、 检测溶液 A:1×120 /瓶(1:100)。临用前以检测稀释液 A 1:100 稀释(如:10 检
测溶液A / 990 检测稀释液A),充分混匀,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总
量配制 (100 /孔),实际配制时应多配制 0.1-0.2ml。
7、 检测溶液B:1×120 /瓶(1:100)。临用前以检测稀释液B 1:100稀释。稀释方法同检
测溶液A。
8、 底物溶液:1×10ml/瓶。
9、 浓洗涤液:1×30ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25 倍。
10、终止液:1×10ml/瓶(2 mol/L H SO )。
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11、覆膜:5 张
12、使用说明书:1
自备物品
1、 酶标仪(建议仪器使用前提前预热)
2、 微量加液器及吸头,EP 管
3、 蒸馏水或去离子水,滤纸
标本的采集及保存
1、 血清:全血标本请于室温放置2 小时或4 过夜后于 1000 g 离心20 分钟,取上清即可
检测,或将上清置于-20 或-80 保存,但应避免反复冻融。
2、 血浆:可用EDTA 或肝素作为抗凝剂,标本采集后30 分钟内于 1000 g 离心15分钟,取
上清即可检测,或将上清置于-20 或-80 保存,但应避免反复冻融。
3、其它生物标本:请1000 g 离心20 分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20 或-80 保
存,但应避免反复冻融。
4、 样本处理:血清或血浆标本推荐稀释10 倍,如:稀释10 倍,取100uL 血清或血浆加入
900uL 样品稀释液。标本使用0.02 M 的PBS 稀释( PH=7.0-7.2)。
注:以上标本均应密封保存,4 保存应小于 1 周,-20 不应超过 1 个月,-80 不应超过2
个月;标本溶血会影响最后检测结 ,因此溶血标本不宜进行此项检测。
操作步骤
实验开始前,各试剂均应平衡至室温,试剂不能直接在 37 溶解;试剂或样品配制时,
均需充分混匀,混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量,如样品浓度过高时,应对样
品进行稀释,以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围,计算时再乘以相应的稀释倍数。
1、 加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液 100
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