生物芯片检测细胞中microRNA表达.pdfVIP

维普资讯 生 LETIERSIN B1100TECHHN0L0GY V…o1．·1 NoO·Nov．，·220…01 955 文章编号：1009—0002(2007)06—0955—03 研究报告 生物芯片检测细胞中microRNA的表达 马卓娅 ，李欣 ，汤华 ，刘民 1．深圳市儿童医院，广东 深圳 518026；2．天津市生命科学 中心实验室，天津医科大学，天津 300070 [摘要] 目的：制备 microRNA(miRNA)检测芯片，检测细胞 中miRNA 的表达。方法 ：将210个(206个 miRNA，4个 阳性对 照)与已知人类和小 鼠miRNA互补 的序列作为探针 ，点干玻片上制备寡核苷酸芯片；提取肿瘤细胞(HeLa，MCF一7，A549， HT一29，ES一2，K562)的miRNA，用荧光染料 Cy3标记 ，并与制备好 的芯片杂交；用 ScanArrayTExpress1．0扫描仪扫描荧光 信号，采用 ScanArray3．0和Cluster3．0软件分析处理扫描结果，并用 RT—PCR方法对芯片检测结果进行验证 。结果：建立 了 利用生物芯片检测 miRNA表达 的方法 ；发现不 同细胞 miRNA表达谱各异。结论 ：应用生物芯片技术检测细胞 中miRNA 的 表达是可行的，可为研究miRNA的生理功能和作用机制奠定基础。 [关键词] 寡核苷酸芯片；microRNA(miRNA)；表达谱 [中图分类号] Q789 [文献标识码] A M icroRNA Expression in CellsDetected by oligOnucleOtjde M icroarray MA Zhuo-ya。，LIXin2,TANG Hua LIU Min 1．Shenzhen ChildrensHospital，Shenzhen 518026； 2．TianjinLifeScienceCenter，TianjinMedicalUniversity，Tianjin300070，China [Abstract] Objective：Toestablishanoligonucleotidemicroarraysystem thatenablesefficientanalysisoftheexpression ofthemicroRNA(miRNA)identified．Methods：Themicroarraywaspreparedbyspotting210oligonucleotideswhichcon— tains 206 probes complementary with human and mouse miRNA sequence and 4 positive controloligos． miRNAsfrom HeLa，MCF一7，A549，HT-29，ES-2，K562 were extracted and labeled with Cy3 and then hybridized tothe miRNA mi— croarray．Th en，slideswere scanned by ScanArrayTExpress1．0 and imageswere analyzed byScanArray3．0 and Cluster3．0． Resultswereconfirmed by RT-PCR．Results：A method ofmicroarrayto detectmiRNA wassetup and itwasfound that the differentcellshasunique expression profiles．Conclusion：Thisstudy hasdemonstrated the feasibility ofusing themi—