荧光分析法测定邻羟基苯甲酸和间羟基苯甲酸实验.pdfVIP

仪器分析实验报告—实验五 荧光分析法测定邻-羟基苯甲酸和间-羟基苯甲酸 实验五 荧光分析法测定邻-羟基苯甲酸和间-羟基苯甲酸 学 姓名 张中豪 实验日期 2009 年 3 月 16 日 第 一 组 同组姓名 张雪、张琳琳、傅磊、洪延 教师评定 . 【实验目的】 1. 学习荧光分析法的基本原理和操作； 2. 用荧光分析法进行多组分含量的测定。 【实验原理】 1、荧光分析法原理： 当被测物质受到光照后，被测物分子吸收了具有特征频率的辐射能，分子从基态上升到激发态，分子 在较高能级的激发态时，它可能处于激发态中各种振动状态的一种。然而由于分子通过与溶剂分子、同类 分子或其他分子的碰撞，而失去振动能级，降低至激发态时的最低振动能级，在此过程中并不发光。但当 分子从激发态的最低振动能级，即第一电子激发态的最低振动能级跃迁至基态的各个不同的振动能级时， 则以光的形式辐射出能量，所辐射出的光既是荧光。 荧光物质的荧光强度与其浓度、分子结构和化学环境（如体系的 pH、温度）有关。而且与体系所吸收 的激发光强度成正比，则： F =Φ(I −I ) 0 式中，F 为荧光强度；I 为入射光的强度； 为通过厚度为b 的介质后的光强度； 为量子效率，为 I Φ 0 发射的光子与吸收的光子之比。又比尔定律可得： −εbc F I (1 10 ) =Φ − 0 式中，ε为荧光分子的摩尔吸光系数；b 为液槽的厚度；c 为荧光物质的浓度。对于很稀的溶液，投射 到样品溶液上被吸收的激发光不到 2%时，即εbc 0.05 时，则上式可近似写为： F 2.303=ΦI εbc 0 1 仪器分析实验报告—实验五 荧光分析法测定邻-羟基苯甲酸和间-羟基苯甲酸 当入射光强度一定时，实验条件一定时，则 ： F Kc 即在低浓度时，荧光强度与荧光物质的浓度呈线性关系，这就是荧光定量分析的基础。荧光强度和溶液浓 度呈线性关系只限于极稀的溶液，对于较浓的溶液，其吸光度超过 0.05 时荧光强度与浓度的线性关系将 发生偏离。 2、激发光谱和发射光谱： （1）激发光谱： 荧光是光致发光，因此必须选择合适的激发光波长，这可以从它们的激发光谱曲线来确定。绘制激发 光谱曲线时，选择荧光的最大发射波长为测量波长，改变激发光的波长，测量荧光强度的变化。以激发波 长为横坐标、荧光强度为纵坐标作图，即得到荧光化合物的激发光谱。激发光谱的形状与吸收光谱的形状 极为相似，经校正后的真实激发光谱与吸收关顾不仅形状相同，而且波长位置也一样。这是因为物质分子 吸收能量的过程就是激发过程。 （2）发射光谱： 发射光谱简称荧光光谱。如果将激发光波长固定在最大激发波长处，然后扫描发射波长，测定不同发 射波长处的荧光强度，即得到荧光光谱。 3、试验方法机理：