鲟源致病性嗜水气单胞菌X1分离鉴定与药敏特性研究.pdfVIP

作者简介：付京花，讲师，专业领域：水产养殖，电子信箱：fuii-ghua@scau．edu．cn 鲟源致病性嗜水气单胞菌X1的分离鉴定与药敏特性研究 李圆圆 曹海鹏杨先乐 (农业部渔业动植物病原库上海海洋大学上海200090) 西伯利亚鲟(Acipenser 是现存26种鲟类中的一种，主要分布于俄罗斯西部的颚毕河至东部的科雷马河之间 的西伯利亚各河流之中。西伯利亚鲟自1996年首次被中国引进，目前其养殖量仅次 于施氏鲟(Acipenserschrenckii)，居中国鲟鱼养殖产量的第2位。然而，近年来病 害的发生已成为鲟鱼养殖业可持续发展的瓶颈。因此，关于鲟鱼病害的分离鉴定及其 药敏特性等基础理论研究对鲟鱼病害的有效防治显得尤为重要。2006年6月中旬，我 国浙江省干岛湖鲟鱼养殖场的西伯利亚鲟感染了严重的以“肌肉、肾脏、性腺、肠道 充血、出血，肝脏有出血点，肛门红肿并伴有血水流出为主要病症的细菌性败血症。 本实验从患细菌性败血症的西伯利亚鲟体内分离得到4株优势菌株，其中仅菌株 X1经人工回归感染试验证实对西伯利亚鲟具有极高的致死率，经毒力试验证实该菌株 具有较强致病力，半数致死浓度(LC50)为5．62×105cfu／ml。在电镜下观察了菌株 lamX2．1—2．4IXm，周生 X1的形态，菌株X1为革兰氏阴性杆菌，菌体大小为1．0—1．2 侧鞭毛，在兔血琼脂平板上能形成明显的B一溶血圈，经ATB细菌鉴定仪鉴定和16S rDNA序列分析，菌株X1为嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophila)；其系统发育分 析表明，菌株X 的亲缘关系最近，其同源性为99％。此外，药敏实验采用I(B纸片扩散法，菌株X1对 先锋必、左氟沙星等2种药物高度敏感，对妥布霉素、氟哌酸、舒普深、卡那霉素、 庆大霉素、复达欣、万古霉素、新霉素、多粘菌素B、洛美沙星等10种药物中度敏感。 嗜水气单胞菌一般单鞭毛，以极生鞭毛运动。而本实验分离的嗜水气单胞菌X1 为周生侧鞭毛，这与已报道的鲟源嗜水气单胞菌分离株明显不同，是国内具有周生侧 鞭毛的鲟源嗜水气单胞菌的首次报道。侧生鞭毛的形成，可能与嗜水气单胞菌的纠从， 菌生理生化特性的ATB细菌鉴定系统操作方便，结果准确，但数据库中模式菌种数量 119 有限，部分细菌只能鉴定到属，对革兰氏阳性菌和厌氧菌的鉴定效果较差；而分子遗 传学鉴定虽然可从本质上阐述细菌间的亲缘关系，但专业性强，鉴定时问长。因此， 本实验在菌株x1的分类鉴定时，将生理生化特性测定与16SrDNA序列分析鉴定相结 合，使鉴定方法更科学，鉴定结果更可靠、更准确。本实验结果表明，嗜水气单胞菌 X1对先锋必、左氟沙星等2种药物高度敏感，对氟哌酸、卡那霉素、庆大霉素、新 霉素、多粘菌素B、洛美沙星等10种药物中度敏感，本实验选取的药物并非均可用 于生产，在本实验中仅用于分析嗜水气单胞菌X1的药敏特性，从嗜水气单胞菌X1的 药敏实验结果来看，嗜水气单胞菌X1对新生霉素、青霉素等水产常见抗生素已产生 较强的耐药性，这警示养殖者在鲟鱼养殖过程中要慎重使用渔用抗生素，尽量防止细 菌耐药性的产生与加重。 动物病害研究，电子邮箱：xlyang@shfu．edu．crl 分光光度法测定海参多糖含量方法的改进宰 李燕妮车业娜 刘国静 (滨州医学院药学院烟台264003) 天青I试剂法测定海参多糖含量的原理是利用天青I试剂与海参多糖特异性结合 呈蓝紫色，在515nm波长处测定吸光值。此法可以精确地测定海参多糖的含量，检出限 u 为5 g，并且专署性极强。本文对天青I方法进行了改进，在前人研究的基础上优化了 标准曲线，确定了该曲线的量程范围，使其具有专署性、精确性的同时，真正具备了可 操作性。 天青I试剂测定海参多糖含量方法在量程范围内线性关系良好，较其他分光光度法 能够较好地避免杂质的影响。须要注意的是：(1)多糖溶液在进行测定之前必须先除盐， 并且调整样品溶液的pH值至中性。金属离子的存在或酸碱会严重地干扰测定。(2)测定 天青I试液的浓度不能太大或太小，如果浓度太大，其本身的吸光值就超过最佳测量范 围，增加系统误差：如果浓度过小，则导致量程减