Ln5γ2对胃癌细胞迁移、侵袭影响和机制与研究.pdfVIP

转lt Ln5 Y2对胃癌细胞迁移、侵袭的影响和机制研究 郝迎学余佩武 曾冬竹 罗华星张帆杨卫军 中国人民解放军第三军医大学西南医院全军普通外科中心、微创胃肠外科中心 【摘要】 肿瘤微环境与胃癌细胞的侵袭转移关系密切，尤其是其中的层粘连蛋白(Laminins)与胃癌等恶性肿瘤的预 后密切相关。 目 的： 探讨Ln5Y2对胃癌SGC一7901侵袭迁移的影响及可能机制。 方法： y2诱导趋化SGC一7901观 实验分组，对照组(A)、EGFR干扰组(B)、空载体组(C)。将SGC一7901以Ln5 液中MMP一2和MMP一9浓度以及细胞骨架结构改变。 结果： Ln5 y 糊，伪足形成减少或消失。 结论： Ln5Y2可以促进胃癌SGC-7901侵袭迁移，可能机制为通过EGFR改变细胞骨架结构，影响MMPs的分泌。 恶性肿瘤发生远处转移是导致病人预后不良的主要原因，而肿瘤细胞侵袭入血是肿瘤发生转移和再转移的 前提。肿瘤的转移是指肿瘤细胞产生新的转移表型、脱离原发灶，迁移并进入循环系统，停留并在新的器 官内增殖的过程[1]。就分子水平而言，肿瘤的转移表型主要由细胞表面受体及其相关的信号分子，与受 体作用的配体等决定的。而肿瘤表型的变化与肿瘤细胞周围的微环境关系密切，肿瘤微环境包括一些基质 Y2与肿瘤细胞的相互作用被认为是肿瘤侵袭和 成分和单核巨噬细胞。近期研究发现，在肿瘤微环境中Ln5 转移的关键事件[2，3]。本研究通过体外合成Ln5Y2因子，观察其对胃癌细胞迁移、侵袭的影响，并在抑 制细胞表面EGFR的情况下，再观察其作用，同时检测细胞骨架和基质金属蛋白酶(MMPs)的变化，从而探 Y 讨Ln52与胃癌细胞迁移、侵袭的关系和可能机制，为临床抑制胃癌细胞侵袭转移提供新的靶点。 1材料与方法 1．1材料 Costar公司)；Matrigel(美国BDBiosciences公 凯公司设计合成)；Transwell小室(美国Corning humanELISA loidin—FITC、B—tubulin 司)；MMP-2、MMP-9 KIT96T试剂盒(武汉博士德生物)；Phal TM (美国Sigma公司)：脂质体细胞转染试剂Lipofectamine 检测仪(BIORED公司)。 i．2方法 Y2Domain 1．2．1体外合成Ln5 III片断 Ln5 2Domain Y2的活性部分为DomainIII片断，根据Ln5Y III基因序列，目的氨基酸序列为： MDQ 设计如下引物： 24 7 7 LAMC2d3一l：5GGATCCGAGAATCCTGACATTGAG3 LAMC2d3—2：5’CTCGAGCTGATCCATCTGAATCTTCAC3’ 进行原核表达后，采用肠激酶进行酶切，去除Trx及S—Tag标签，同时利用后续的His标签进行纯化。 1．2．2细胞培养 37。C培养箱中传代培养。每l周传代1 胃癌细胞SGC一7901于含10％胎牛血清的DMEM培养液5％C02 次，每隔2、3天换液1次。 1．2．3质粒转染 TM 用脂质体Lipofectamine