DHEA在TM-3细胞中的生物转化及其对类固醇激素代谢关键酶的表达影响.pdfVIP

·204· 畜牧与兽医2012年第44卷增刊 2．96DHEA在TM．3细胞中的生物转化 及其对类固醇激素代谢关键酶表达的影响 沈学怀，刘琳，谢正露，殷复建，周英俏，丁遭，马海田 (南京农业大学农业部动物生理生化重点实验室， 江苏南京210095) 本试验以TM．3细胞(小鼠睾丸间质细胞)为研究对象，探讨DHEA在胞内的生物转化及其 对类固醇激素代谢关键酶表达的影响。以含DHEA终浓度为100 IJ．rnoULl幂J培养液处理细胞，以只 h、3h、12h、24 含有相同浓度DMSO(0．1％)为对照组，分别在DHEA孵育0 h和48h后收集细 胞及培养液。采用液质联用技术检测细胞裂解液中DHEA、睾酮、雌二醇、雌酮、孕酮、皮质醇、 皮质酮、17a．羟孕酮含量变化；westernblot法检测类固醇代谢途径中关键酶／蛋白因子的表达变 h、3h、12h、24h和48h后，细胞裂解液中 化。结果表明，TM．3细胞经100 DHEA处理0 lmaol／L h)下降到17．90 h)；睾酮含量随着DHEA处理时间 DHEA的浓度从34．12ng／mL(0 ng／mL(48 的延长逐渐增加，其含量在3～48h内从0．256 ng／mL增加到5．41ng／mL，睾酮和DHEA之间表现 h) 显著的负相关(P0．05)：雌二醇随着处理时问的延长逐渐增加，其含量从15．26ng／mL(0 h)，雌二醇与DHEA之间呈现显著的负相关(P0．05)；雌酮和皮质 增加到167．16ng／mL(48 醇的浓度随着处理时间的延长而逐渐降低，两者与DHEA间均呈现显著的正相关，其相关系数分 别为0．958(P0．01)和0．752(尸0．01)；孕酮虽然在DHEA处理03h内未检测到，但在处理 12～48 h后的细胞裂解液中孕酮含量则显著升高；皮质酮和17a-羟孕酮含量均因低于检测限未能 检出；与对照组相比，DHEA处理12h后细胞总胆固醇水平显著下降(PO．05)。相关酶／蛋白因 h h后StARmRNA表达显著降低(PO．05)，而后其表达升高，在24 子分析表明，DHEA处理3 mRNA表达在DHEA处理3h显著提高(PO．05)， 和48h时显著高于对照组(PO．01)；P450scc h可显著提高CYPl7amRNA表达水平 随后表达下降并在12h后恢复到正常水平；DHEA处理3 h和48h时CYPl7amRNA表 (P0．05)，而后其表达水平逐渐降低并再次升高，至DHEA处理24 达水平又显著高于对照组(尸≮0．05)：DHEA处理12～48h内，TM．3细胞内3B—HSD蛋白表达水 平显著升高(PO．05)，与其对照组相比，DHEA处理TM．3细胞24～48h可显著提高3B．HSD蛋 h时显著升高(p，o．05)，处理组内 白表达水平(PO．05)；17p．HSD蛋白水平在在DHEA处48 不同时点17p-HSD蛋白表达水平无显著性变化(P0．05)；芳香化酶蛋白水平随着DHEA处理时 间的延长逐渐降低，在DHEA处理24-～48h内，TM．3细胞中芳香化酶的蛋白表达水平则显著降低 (P0．05)。结果提示，DHEA与其在TM．3细胞中的生物转化中中间产物与终产物及终产物之间 存在着显著的