维甲酸对鸡胚生殖细胞减数分裂调控机理及研究.pdfVIP

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2015-07-22 发布于安徽
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维甲酸对鸡胚生殖细胞减数分裂调控机理及研究.pdf

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维甲酸对鸡胚生殖细胞减数分裂调控机理的研究于敏莉俞萍米玉玲张才乔* 浙江大学动物科学学院动物医学系，浙江杭州310058 摘要：减数分裂是生殖细胞特有的分化形成配子的过程，且在雌雄两性的发生时间不同。雌性卵巢内生殖细胞在胚胎期即开始进入减数分裂，并停滞在减数分裂Ⅰ期。但在胚胎期睾丸中，因为维甲酸(RA)被其代谢酶CYP26B1 降解，使生殖细胞停滞在有丝分裂G0/G1期。在本实验中，我们结合胚胎期卵巢的体外培养和RNA干扰等手段，探索RA对鸡胚胎期生殖细胞减数分裂的调控及作用机制。SCP3和γH2AX免疫荧光染色结果表明，鸡胚卵巢内生殖细胞在15.5天进入减数分裂，其比例逐渐增加。到18.5天时，进入减数分裂的细胞几乎遍布整个卵巢。减数分裂早期标志基因Strs8mRNA的表达在12.5天开始上调，而减数分裂标志基因Scp3和DmcJmRNA的表达则在15.5 天显著上调，再次验证鸡胚卵巢生殖细胞在15.5天进入减数分裂。RA合成酶基因Raldh2在15.5天显著上调而降解酶Cyp26b1却逐渐下降，表明Raldh2在RA聚集并维持减数分裂中起着重要的作用。RA受体RARβ在此过程略微升高。在雄性睾丸中，这些基因的表达变化很小，一直保持在较低水平。10.5天和12.5天鸡胚卵巢在无血清的体外培养体系中分别培养5天和3天后，生殖细胞能自发启动减数分裂；添加RA能显著上调减数分裂相关基因mRNA 的表达水平。Raldh2shRNA干扰可显著抑制RA对减数分裂启动的诱导作用。以上结果表明，Raldh2在RA合成及 RA信号通路对生殖细胞减数分裂启动中有着重要的调控作用，并首次报道了Raldh2基因敲减可显著抑制生殖细胞进入减数分裂。关键词：鸡胚；生殖细胞；维甲酸；减数分裂；shRNA干扰 k鸡厂，在直蚓 I巢形态． g减数塌；染色进 ^bryonlcd句 -P像检测l 年解酶在； ‘千 DA i后我们又j ；诱导了勋丝分裂i 习控角色。 o±E fildsAJ