牛奶中蛋白质含量测定.docVIP

牛奶中蛋白质含量的测定 摘要：通过国标牛奶中蛋白质的测定找出它的不足之处，用新的方法进行蛋白质的测定。 关键词：蛋白质 测定凯氏定氮用凯氏定氮的方法检测蛋白质含量。蛋白质测定的国标规定方法——凯氏定氮法介绍 【GB/T 5009.5—1985】 食品中蛋白质的测定方法 本标准适用于各类食品中蛋白质的测定。 1 原理 蛋白质是含氮的有机化合物。食品与硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即为蛋白质含量。 2 试剂 所有试剂均用不含氨的蒸馏水配制。 2.1 硫酸铜。 2.2 硫酸钾。 2.3 硫酸。 2.4 2%硼酸溶液。 2.5 混合指示液：1份0.1%甲基红乙醇溶液与5份0.1%溴甲酚绿乙醇溶液临用时混合。也可用2份0.1%甲基红乙醇溶液与1份0.1%次甲基蓝乙醇溶液临用时混合。 2.6 40%氢氧化钠溶液。 2.7 0.05N硫酸标准溶液或0.05N盐酸标准溶液。 3 仪器 定氮蒸馏装置：如图所示。 （图略） 4 操作方法 4.1 样品处理：精密称取0.2～2.0g固体样品或2～5g半固体样品或吸取10～20ml液体样品(约相当氮30～40mg)，移入干燥的 100ml或500ml定氮瓶中，加入0.2g硫酸铜，3g硫酸钾及20ml硫酸，稍摇匀后于瓶口放一小漏斗，将瓶以45°角斜支于有小孔的石棉网上。小心加热，待内容物全部炭化，泡沫完全停止后，加强火力，并保持瓶内液体微沸，至液体呈蓝绿色澄清透明后，再继续加热0.5h。取下放冷，小心加20ml 水。放冷后，移入100ml容量瓶中，并用少量水洗定氮瓶，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀备用。取与处理样品相同量的硫酸铜、硫酸钾、硫酸按同一方法做试剂空白试验。 4.2 按图装好定氮装置，于水蒸气发生瓶内装水至约2/3处，加甲基红指示液数滴及数毫升硫酸，以保持水呈酸性，加入数粒玻璃珠以防暴沸，用调压器控制，加热煮沸水蒸气发生瓶内的水。 4.3 向接收瓶内加入10ml 2%硼酸溶液及混合指示液1滴，并使冷凝管的下端插入液面下，吸取10.0ml样品消化稀释液由小玻杯流入反应室，并以10ml水洗涤小烧杯使流入反应室内，塞紧小玻杯的棒状玻塞。将10ml 40%氢氧化钠溶液倒入小玻杯，提起玻塞使其缓缓流入反应室，立即将玻塞盖紧，并加水于小玻杯以防漏气。夹紧螺旋夹，开始蒸馏。蒸气通入反应室使氨通过冷凝管而进入接收瓶内，蒸馏5min。移动接受瓶，使冷凝管下端离开液面，再蒸馏1min。然后用少量水冲洗冷凝管下端外部。取下接收瓶，以0.05N硫酸或0.05N盐酸标准溶液滴定至灰色或蓝紫色为终点。 同时吸取10.0ml试剂空白消化液按4.3操作。 4.4 计算 式中：X——样品中蛋白质的含量，%； V1——样品消耗硫酸或盐酸标准液的体积，ml； V2——试剂空白消耗硫酸或盐酸标准液的体积，ml； N——硫酸或盐酸标准溶液的当量浓度； 0.014——1N硫酸或盐酸标准溶液1ml相当于氮克数； m——样品的质量(体积)，g(ml)； F——氮换算为蛋白质的系数。蛋白质中的氮含量一般为15～17.6%，按16%计算乘以6.25即为蛋白质，乳制品为6.38，面粉为5.70，玉米、高粱为6.24，花生为5.46，米为5.95，大豆及其制品为5.71，肉与肉制品为6.25，大麦、小米、燕麦、裸麦为5.83，芝麻、向日葵为 5.30。 附加说明： 本标准由全国卫生标准技术委员会食品卫生标准分委员会提出，由卫生部食品卫生监督检验所归口。 本标准由卫生部食品卫生监督检验所负责起草。1为滴定样品时消耗盐酸溶液的体积，mL；V2为滴定空白消化液时消耗盐酸的体积，mL；W 为样品的重量，g；14为氮的相对原子量。 微波消解是近年来产生的一种崭新的样品处理技术，它结合了高压消解和微波快速加热两方面的性能。 该法的优点是：①微波加热是“内加热”，具有加热速度快、加热均匀、无温度梯度、无滞后效应等特点。②消解样品的能力强，特别是一些难溶样品，传统的消解方式需要数小时甚至数天，而微波消解只需要几分钟至十几分钟。 ③溶剂用量少， 用密封容器微波溶样时，溶剂没有蒸发损失，一般只需溶剂 5 mL~10 mL。 ④减少了劳动强度，改善了操作环境，避免了有害气体排放对环境造成的污染。 ⑤由于样品采用密闭消解，有效地减少了易挥发元素的损失。 优点 将蛋白质测定中消解方法改为微波消解法，由于样品与试剂的反应是在密闭的容器内进行的，所以对环境的污染大大减小，采用硫酸和过氧化氢混合液为消解试剂，试剂用量少，消化速度快且消化彻底。 仪器在设定的程序下，可自动完成消解操作，操作方便，减轻