荧光原位杂交检测在孕妇早期流产绒毛组织中应用.pdfVIP

3．26 荧光原位杂交检测在孕妇早期流产绒毛组织中的应用 贵州I省人民医院中心实验室骆姝琳 随着分子生物学技术的快速发展，使得对大量的遗传病、基因突变进行筛 insitu 查和诊断成为可能。荧光原位杂交(fluorescenceization，FISH)技术是 hybrid 80年代中期发展起来的非放射性原位杂交技术，目前已逐渐成为快速诊断染色 体异常的一种重要方法。 所谓FISH技术是采用直接或间接荧光标记的DNA特异性探针与与变性 后的染色体、细胞、组织中的靶核酸序列按照碱基互补配对原则进行杂交，经洗 涤后直接(或通过免疫荧光信号扩增)在荧光显微镜下检测，从而对靶目标中的 待测核酸进行定性、定位或定量的研究。与其它原位杂交技术相比，FISH的优 点是：①敏感性高，特异性强，背景低；②快速方便；③宜于多靶杂交，对同一 标本同时进行多个探针杂交，不同的探针可以显示不同的荧光颜色。 目前FISH 技术已广泛用于检测遗传病，肿瘤以及其它疾病染色体数目和结构的异常，基因 定位，标记染色体的来源确认等等，在我实验室，主要运用于羊水的产前诊断、 流产绒毛组织的遗传学诊断、膀胱癌的基因诊断等。 在临床的工作中约有15％～20％临床确诊的妊娠以自然流产而告终， 其中大多数(80％)是处于胚胎早期。目前我院常见流产情况一般包括：连续发 生3次或3次以上自然流产者即习惯性流产者，试管婴儿流产者等，已经严重 影响着妇女的生殖健康。 为了探讨常见自然流产的原因，为指导临床提供可靠的实验室依据，我实 验室从2011年4月开始应用荧光原位杂交技术检测孕早期流产绒毛组织。主要 运用18号、X、Y染色体着丝粒探针以及13q14和21q22特异性探针，对早期流 产的绒毛组织细胞进行荧光原位杂交(FISH)，然后用荧光显微镜进行观察，并用荧 光成像系统进行摄像和后期处理。 自开展以来，共接收习惯性流产妇女的绒毛组织20例、试管婴儿绒毛组 织5例。其中发现习惯性流产者18三体1例、21三体1例；试管婴儿三倍体l 例；其余23例均正常，排除了胎儿染色体异常的流产原因。对于上述异常病例 的处理：习惯性流产史患者，夫妻双方进行外周血染色体核型分析，排除夫妻双 方本身遗传信息的异常，若为其夫妻本身遗传因素异常，则应及时咨询临床医生、 慎重考虑再孕。试管婴儿植入者，建议夫妻双方进行外周血染色体核型分析，同 时应进行植入前遗传学诊断(preimplantationgeneticdiagnosis，PGD)，最终确定该 胚胎是否适宜移植。 自然流产对有染色体异常的胚胎是一种重要的自然淘汰过程，因而临床上早 孕期出血患者，胚胎有染色体异常的可能，而传统的流产绒毛遗传学诊断具有许 多难以克服的局限性，如标本采集的无菌要求、培养耗时长(7—14天)、技术稳定 性差等，给我室开展全面分析早期流产的原因带来了一定困难。因此在今后的工 作中还需尽可能的完善实验条件，优化实验方法，尽量能够结合早期流产绒毛组 织的核型分析、植入前遗传学诊断PGD、更为全面的为临床提出可靠的实验依 据，指导临床。 226