营养水平对后备母猪卵巢microRNA-378的表达影响及microRNA-378作用机制与研究.pdfVIP

中囝畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十六届学术研讨会论文集 i i 营养水平对后备母猪卵巢mcroRNA-378表达影响及mcroRNA-378 作用机制研究，， Linher-Nelvi Li 11e2，王定越1，周东胜1， 2，吴德H 徐盛玉1，Katja Julang ofAnimaland (1．四川农业大学动物营养研究所，四川雅安625014；2．DepartmentPoultry of N1G Guelph，Guelph，0ntario，Canada2W1) Science，[Iniversity 引言 本研究旨在探明营养水平对后备母猪卵巢miR．378表达的影响及miR-378对卵巢颗粒细 胞功能的影响，揭示miR．378在繁殖内分泌上发挥作用的分子机制，阐明营养调控繁殖内分 泌的途径之一可能是通过营养影响卵巢miR．378的表达而实现。 材料与方法 后备母猪随机分为两个处理，按正常采食水平(2．5 kg／d)和过度限饲(O．5kg／d)分别 PCR系统测定miR．378的表达。 饲喂。后备母猪在第三次发情时屠宰取样。应用miScript 分子克隆获得可以表达miR．378的重组质粒；通过HEK293FT细胞的培养包装重组 响。通过基因定点突变技术、荧光素酶分析等试验手段研究miR．378调控芳香化酶、孕酮受 体表达的分子机制。过表达芳香化酶3’UTR及miR．378抑制剂反向研究miR．378对颗粒细 胞的作用及机制。 结果 营养水平显著影响后备母猪发情率，过度限饲组母猪出现全部不发情现象。营养水平影 响后备母猪卵巢miR一378的表达水平，正常营养水平组显著低于过度限饲组。正常水平组大、 小卵泡的颗粒细胞中均表达miR．378，且大卵泡颗粒细胞的表达量显著低于小卵泡颗粒细胞， 说明miR．378在卵泡发育过程中可能发挥了重要作用。 沉淀法制备慢病毒。慢病毒转导颗粒细胞后过表达miR-378促进颗粒细胞的增殖和提高细胞 抗凋亡的能力；尽管miR．378在转录水平上对PGR和aromatase的表达差异未达显著水平， 但在翻译水平上却抑制了二者蛋白的合成；试验同时研究了miR一378对FSHR、GDNF、和 MAPK蛋白表达的影响，但差异均未达显著水平；试验还发现过表达miR-378抑制了颗粒细 胞合成雌二醇。 野生型和突变的3’UTR特定位点的双荧光素酶分析结果证明miR．378通过靶定结合 aromatase和PGR 挥调控作用。颗粒细胞内过量表达aromatase3’UTR质粒和转染miR．378抑制进一步从反方 向证明了miR-378发挥作用的机制。 讨论 本研究发现营养可以影响后备母猪卵巢miR．378的表达，miR．378可以通过靶定PGR 和aromatase 3’UTR上的特定位点在这两种基因的转录后水平起调控作用影响其蛋白表达水 成，雌二醇是影响繁殖成绩的重要指标，由此阐明了营养影响卵巢miR．378的表达是实现营 养调控繁殖内分泌的途径之一。 参考文献 略 ‘通讯作者：吴德，教授，四川农业大学动物营养研究所；E-mail：pi92pig@sina．com 部分结果已发表于Endocrionlogy,2011。152(i0)：3941—3951． 132