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饲料中霉菌毒素检测技术研究进展 霉菌毒素普遍存在于饲料以及饲料原料中，据美国食品和药物管理局的调查表明，全球25%的饲料及饲料原料受到霉菌毒素的污染。饲料中霉菌毒素影响动物的健康和生产性能，如动物对霉变饲料中养分的利用率显著下降；因采食霉变饲料而诱发的多种动物疾病；影响饲料适口性；产毒霉菌和致病细菌等存在的几率大大提升。饲料中霉菌毒素对动物的影响通过食物链传递到食品安全，同时对人类健康也产生了威胁，所以必须对饲料及原料中霉菌毒素水平进行实时监控。本文对饲料中霉菌毒素常规检测技术作了简要综述，并总结了霉菌毒素检测技术近十年的发展，为霉菌毒素的检测工作提供科学参考。 1 霉菌毒素检测的样品处理 在霉菌毒素检测的取样、制样和分析中都客观的存在一定误差。由于真菌毒素的污染是极不均匀的，在农产品中的存在“10-9”水平，所以取样环节产生的误差最大，约占总误差的85%以上，而制样与分析两个环节共占总误差的15%以下。采样要注意代表性并防止污染，准备灭菌容器和工具，详细记录样品相关信息，低温干燥保存，及时检测。原始样品必须粉碎后进行二次取样，粉碎粒度越小，样品均匀度越好。如果样品粉碎粒度不佳，可以将粉碎样品放入搅拌机中加入适量溶剂（水或庚烷）搅拌成泥浆状。霉菌毒素的提取常用的提取溶剂，如：甲醇、三氯甲烷、丙酮、乙酸乙酯、乙腈和水的混合物。定性分析还需对提取液中的霉菌毒素进行分离。 2 常规霉菌毒素分析测定技术 霉菌毒素的分析测定不仅要考虑精确度，还要考虑分析的速度、成本以及分析能否提供定性或者定量的结果。分析测定应该根据分析目的以及实际情况选取快速、简单和定量的方法。 2.1 薄层色谱测定法（Thin Layer Chromatography，TLC） 薄层色谱测定法（TLC）是最早建立的一种检测方法，具有简便、经济、对设备和检验人员要求不高等特点。此法的原理是针对不同的样品，使用适宜的提取溶剂将霉菌毒素从样品中提取出来，经柱层析净化，再在薄层板上层析展开、分离，利用霉菌毒素的荧光性，根据荧光斑点的强弱与标准比较测定其最低含量。大麦和咖啡豆中指曲霉毒素A的TLC检测方法分别在1973年和1975年首次通过，成为国际分析化学家协会（AssociationofAnalyticalCommunitiesAOAC）的官方方法，1988年成为法定方法[8l。1991年，我国卫生部食品卫生监督检验所等单位建立了谷物和大豆中插曲霉毒素A的TLC分析方法。现国家标准方法仍采用此法检测小麦、玉米、大豆中精曲霉毒素A的含量，检测下限为10问/kg[9]。 2.2 高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC） 高效液相色谱方法（HPLC）在20世纪60年代开始使用，近几年来在各个行业的发展迅速。HPLC法是定量分析真菌毒素的常规方法，其原理是在适宜的流动相条件下，采用固相萃取柱，使多种霉菌毒素同时分离进行检测后再通过测量色谱峰的面积计算含量。该方法的优点是特异性强、灵敏度高、定量准确，可同时分离多种霉菌毒素，操作也简便，适于大批量样品的分析。据报道用HPLC法检测食品中黄曲霉毒素，分离效果好，重复性强，最低检出限达到10-12级水平，回收率在92.61%～99.25%。检测谷物中黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素，检测限分别为0.24、4.0和0.5mg/kg。但此方法的仪器价格昂贵，前期处理繁琐，方法的建立复杂，操作的技术难度大，短时间内难以广泛应用。 2.3 气相色谱法（Gas Chromatography GC） 1986年AOAC就将气相色谱法（GC）引入到小麦中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇含量的检测方法中，检测限为350ng/g。现气相色谱法主要用于脱氧雪腐镰刀菌烯醇的定量检测。GC具有灵敏、高选择性、准确性和精确性等优点。但也存在如下问题：标准曲线线性关系不佳、样品进样的滞留、记忆效应以及基质干扰的存在。GC不及液相色谱法快速，检测费昂贵，技术和操作要求也高，所以在霉菌毒素检测方面的应用较少。 2.4 酶联免疫吸附测定法（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay ELISA） 酶联免疫吸附测定法（ELISA）20世纪70年代初提出，80年代引入国内应用于各种生物化学物质的免疫测定，是检验乙肝、丙肝、艾滋病抗体的主要方法。此法操作简便，灵敏度高，能进行定量分析，特异性强，试剂保存时间长，对环境污染小，目前已经拓展到食品、饲料、肉类等行业。多个国家卫生标准中霉菌毒素的检测方法中都包含此方法，如粮食、发酵酒、发酵性豆制品、淀粉类制品、花生油和其他食用植物油、色拉油、酱油、酱、食醋、婴幼儿配方乳粉Ⅱ、Ⅲ等。现在建立在酶联免疫吸附测定法基础上研发的商业化的试剂盒能在短时