支原体菌属的研究进展.docVIP

微生物分类结业论文 学号：20114081204 支原体菌属研究进展 学生姓名：尘顺 指导教师：孙冬梅 所在学院：生命科学技术学院 专业班级：2011级生物技术（试点）班 中国·大庆 2013 年 12 月 支原体菌属研究进展 摘要： 支原体感染与临床多种疾病密切相关。近年来，随着诊断技术的提高和研究的深入，支原体感染尤其引起人们的重视。本文介绍了支原体的流行病学、致病性、检测方法及治疗等情况，对以上方面的新进展作一综述。 关键词：支原体， 感染， 检测 1 分类研究 支原体是在1898年发现的，是一种简单的原核细胞。其大小介于细菌和病毒之间。结构也比较简单，多数成球形，没有细胞壁，只有三层结构的细胞膜故具有较大的可变性。支原体可以在特殊的培养基上接种生长，用此法配合临床进行诊断。与泌尿生殖道感染有关的主要是分解尿素支原体和人型支原体两种，约有20-30%的非淋菌性尿道炎的病人，是由以上两种支原体引起的，是非淋菌性尿道炎及宫颈炎的第二大致病菌。在成年人的泌尿生殖道中分解尿素支原体和人型支原体感染率主要与性活动有关，也就是说，与性交次数的多少、性交对象的数量有关，不管男女两性都是如此。 2 生态学特征 2.1形态与结构 支原体的大小为0.2～0.3um,可通过滤菌器，常给细胞培养工作带来污染的麻烦。菌落小（直径0.1~1.0mm），在固体培养基表面呈特有的油煎蛋状。无细胞壁，不能维持固定的形态而呈现多形性，对渗透压敏感，对抑制细胞壁合成的抗生素不敏感。革兰氏染色不易着色，故常用Giemsa染色法将其染成淡紫色。细胞膜中胆固醇含量较多，约占36%，对保持细胞膜的完整性具有一定作用。细胞膜含甾醇，比其他原核生物的膜更坚韧。凡能作用于胆固醇的物质（如二性霉素B、皂素等）均可引起支原体膜的破坏而使支原体死亡。支原体基因组为一环状以双链DNA，分子量小（仅有大肠杆菌的五分之一），合成与代谢很有限。 肺炎支原体的一端有一种特殊的末端结构（terminal structure），能使支原体粘附于呼吸道粘膜上皮细胞表面，与致病性有关。 2.2培养 要求营养要求比一般细菌高，除基础营养物质外还需加入10～20%人或动物血清以提供支原体所需的胆固醇。最适pH7.8～8.0之间，低于7.0则死亡，但解脲支原体最适pH6.0～6.5。大多数兼性厌氧，有些菌株在初分离时加入5%CO2生长更好。生长缓慢，在琼脂含量较少的固体培养基上孵育2～3天出现典型的“荷包蛋样”菌落：圆形（直径10～16um），核心部分较厚，向下长入培养基，周边为一层薄的透明颗粒区。此外，支原体还能在鸡胚绒毛尿囊膜或培养细胞中生长。 2..3繁殖方式 繁殖方式多样，主要为二分裂繁殖，还有断裂、分枝、出芽等方式，盖因缺乏细胞壁造成分裂时二个子细胞大小均所致。同时，支原体分裂和其DNA复制不同步，可形成多核长丝体。细胞培养（特别是传代细胞）被支原体污染是个世界性问题。国内外研究表明，95%以上是以下四种支原体：口腔支原体（M.orale）、精氨酸支原体（M.arginini）、猪鼻支原体（M.hyorhinis）和莱氏无胆甾原体（A.laidlawii），为牛源性。以上是最常见的污染细胞培养的支原体菌群，但能够污染细胞的支原体种类是很多的，国外调查证明，大约有二十多种支原体能污染细胞，有的细胞株可以同时污染两种以上的支原体 3 检测方法 随着各种检测支原体方法的相继建立，支原体的检出率大为提高，给临床的诊治带来了很大方便。目前用于检测支原体感染的实验诊断方法主要有以下几种： 3.1 培养法 支原体营养要求较高，大多数能利用葡萄糖和精氨酸作为能源，而Uu和Mh可利用尿素为能源，分解尿素产氨和二氧化碳，使pH值升高，含酚红指示剂的培养液由黄色变红色。所有国内外商品化的支原体肉汤培养基都是根据这个原理设计的。但是仅凭培养基颜色变化来诊断是不可靠的，因为可能有细菌或真菌污染导致假阳性，也有些支原体因不能分解尿素而出现假阴性[1]。因此可靠的方法是将增菌培养物再转种到琼脂固体培养基孵育，观察其典型菌落形态，最终的鉴定应当依据其菌落形态和有关生化反应。国内的很多文献报道中都是仅凭培养基颜色变化来做判断，很容易导致误判，故应引起广泛重视[2]。 3.2 血清学检查 包括补体结合试验、冷凝集试验、凝集试验以及酶联免疫吸附试验等，是目前诊断支原体感染的重要手段。 3.3 分子诊断技术 PCR诊断技术自1985年问世以来得到广泛应用，该技术在支原体的感染诊断中也得到较好应用。在此基础上，之后又相继建立了套式PCR技术（nPCR）、荧光定量PCR技术（FQ-PCR）等，提高了检测的灵敏度、特异度和准确性，成为常规PCR技术的改良。 近年来出现了一种新的支原体检测技术—支原体反向线点杂