HPTLC高效薄层色谱法实践肽类药物中各种氨基酸的定性和.pdfVIP

HPTLC 高效薄层色谱法实践 肽类药物中各种氨基酸的定性和定量分析 从左至右: L. Hamon, F. Diancourt, L. Roy和R. Sbaffo-Poasevara* 法国IPSEN公司是一家生产并销售20余种药物的国际化专业药厂，在全 球拥有4000余名雇员。其专注于特定的护理和治疗领域，如肿瘤、内分泌和 神经肌肉障碍症等。坐落于巴黎近郊Les Ulis的Henri Beaufour研究所是 IPSEN的研发中心之一，主任Roseline Sbaffo-Poasevara女士领导着原料药 分析开发部门。该部门的工作重点之一是合成多肽中间体的分析，这些多肽 由天然和非天然氨基酸合成，并可能还连接有一些小分子。在新药注册申请 中需要开发专论方法为肽类药物水解后的氨基酸进行分析。但在新药的开发 过程中，如果能同时对药物中的游离氨基酸进行定量分析将更有帮助。为了 实现上述目标，该部门制定了不同的分析方法，比如最近开始采用的HPTLC。 介绍 肽类药物首先在强酸介质中水解为氨基酸并进行鉴别。在酸水解过程中 部分氨基酸会降解，在这一过程中只有7种氨基酸是稳定的。随后水解产物在 茚三酮衍生化后进行HPLC分析。然而使用HPLC和氨基酸分析仪进行氨基酸 分析耗时且昂贵，并且对于不稳定的氨基酸只能给出半定量的结果。因此该 HPLC方法对于通常的非天然氨基酸的降解和多肽上连接的功能小分子分析 而言缺乏灵活性。 1 CAMAG CBS 101 中文版（2008 年 9 月） 为了进行多肽中游离氨基酸的痕量分析，多 醋酸-吡啶-水（15：3：10：12）或2-丁醇-氨水-吡啶-水 （39:10:34:26）。 肽不能进行水解。当如此大量的多肽样品被注入 注意：通常在水平展开槽中，薄层表面是朝下的。但 色谱柱时，其在水相梯度洗脱时不断被冲洗下来 由于使用了铝箔板，可以面朝上展开以便更好地监视溶剂前 从而影响色谱的分离。但在 HPTLC 分析时，由于 沿。 多肽停留在原点或迁移至溶剂前沿，对于一次性 使用的薄层板而言就不构成问题。因此这种优势 色谱后衍生化 使得 HPTLC 技术被选择用于该阶段的分析。最终 使用CAMAG薄层浸渍设备3型，将薄层板以4.5 cm/s 确立了游离氨基酸的检测限以及多肽水解物中氨 的速度浸渍于茚三酮显色剂 (0.5 %的2-丁醇溶液)中，停留 基酸的定量 HPTLC 分析方法。 1s。此外也可以将茚三酮以5%的比例加入展开剂。然后将 薄层板置于CAMAG加热器上以110 °C加热5min。 对照品溶液的制备 光密度分析 氨基酸对照品（Abu, Ala, Arg, Asp, Aib, Cys, Gln, 使用CAMAG TLC Scanner 3和winCATS工作站软 Glu, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Nal, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp,