SD大鼠肝癌演进中端粒酶活性的动态变化.pdfVIP

第4O卷 第 5期 河南师范大学学报 (自然科学gt) Z．40 No．5 2O12年 9月 JournalofHenanNormalUniversity(NaturalScienceEdition) Sept．2O12 文章编号 1000—2367(2012)05--O142～O3 SD大 鼠肝癌演进 中端粒酶活性的动态变化 刘丹丹 ，王 莉 ，金 白洁 ，王亚威 ，马明霞 ， 李安琪 ，刘骨挺 ，张怡青 ，张红绪 (1．河南师范大学 生命科学学院，河南 新乡 453007；2．新乡医学院三全学院，河南 新乡 453003) 摘 要 ：探讨端粒酶活性在肝癌演进中的变化，用 3-甲基一4一二 甲基氨基偶氮苯 (3-Me-DAB)作诱变剂，建立 SD大鼠肝癌变动物模型．自灌 胃之 日起 ，分别在 2、4、6、8、1O、l2、14、17w分批处死大 鼠，取其肝脏 ，进行病理分级， 然后用 TRAPEIISA法检测肝癌变各时期端粒酶活性，结果显示 ：在轻度炎性反应期 (II)端粒酶活性高于对照组， 呈极显著差异 (P0．01)；重度炎性反应期 (HI)端粒酶活性有所下降，但仍高于对照组，且呈显著性差异 (P 0．05)；至腺瘤样增生 (NH)和肝 内胆管细胞癌 (CCC)时端粒酶活性再次升高，与对照组相 比呈极显著差异 (P 0．01)．提示端粒酶活性增高可能足肝癌变进程 中的重要事件 ，与肝癌 的发生发展密切相关． 关键词：大鼠；肝癌；端粒酶；TRAP—ElISA 中图分类号：Q581；R753．7 文献标志码 ：A 端粒酶(Telom~rase)是维持染色体末端端粒长度 、保持染色体稳定的反转录酶，可抑制细胞衰老和凋亡[1]．端粒酶在正常 细胞 中活性常被抑制 ，而在肿瘤细胞 中可被重新激活 ，参与肿瘤 的恶性转化 ，因此端粒酶成为肿瘤治疗 中重要 的靶蛋 白之一 ． 目前，国内外对肝癌中端粒酶的研究多取材于临床 中晚期标本 ，对肝癌演进 中端粒酶活性变化 的系统研究报道较少．本 研究以3甲基一4一二 甲基氨基偶氮苯 (3-methyl一4一dimethylaminoazobenzene，3-Me—DAB)作诱变剂 ，建立 SD大鼠肝癌变动物模 型，通过检测不同时期肝组织端粒酶活性变化，探讨其在肝癌发生发展过程 中的重要作用及意义，为揭示肝癌发生发展 的分 子机理及肝癌 的早诊断、早治疗提供重要参考依据． 1 材料与方法 1．1 SD大鼠肝癌变模型的建立 1．1．1 实验动物 SD大 鼠6o只(舍。SPF级)，体重(110±10)g，6～8周龄 ，购于河南省实验动物 中心，将其随机分为 2组， 对照组 l6只，诱癌组 44只． 1．1．2 诱癌剂 3-Me—DAB购于 日本东京化成工业株式会社 (TCI)． 1．1．3 建立动物模型 诱癌组大 鼠以含 0．06 3-Me-DAB(即600mg／kg)的标准饲料喂养 14w，之后以标准饲料喂养至17 w．对照组大鼠喂养标准饲料至 17w． 1．2 试剂 FeloFAGGGTelomerasePCRE1ISAKit(Roche)，TERT(端粒酶)原位杂交检测试剂盒 (Boster)． 1．3 组织病理分级 从灌 胃之 日起，分别在 2、4、6、8、1O、12、14、16、17w处死大 鼠，取其肝组织．一部分作为 TRAP—ElISA的材料 ，置于液氮 备用 ；另一部分进行常规石蜡切片及 HE染色，然后 由医学院病理科医生进行病理分级． 1．4 端粒酶活性检测 1．4．1 制备端粒酶提取物 肝组织置于 200 I裂解液中，冰上孵育 30min，4℃下 16000g离心 20rain．取上清，Bradford法 收稿 日期 ：2012-012O · 基金项 目：河南省重点科技攻关项 目(122102310174)；河南省动物重点学科资助 作者简介 ：刘丹丹(1982一)，女，河南禹州人 ，河南师范大学讲师，主要从事哺乳类癌前病变分子机理的研究 通讯作者 1张红绪 ，男 ，河南洛阳人 ，河南师范大学教授 ，E—mail：hxzh5571@sina．corn．