Western及IP细胞裂解液.pdfVIP

北京雷根生物技术有限公司 Western 及 IP 细胞裂解液 产品简介 ： 多种成分均可以从细胞中提取总蛋白 ，如 Triton、SDS、NP-40 等。通用细胞裂解液 (Common Lysis Buffer)是采用一种非变性裂解方法来裂解细胞 ，并获得总蛋白的裂解液。 所获得的蛋白质可以用于 PAGE 电泳 ，Western，免疫沉淀(Immunol Precipitation,IP)和 免疫共沉淀(co-IP)等，主要由 Tris-HCl、NaCl、低浓度 Triton X-100， 低浓度 sodium pyrophosphate 等组成 ，并含有多种蛋白酶抑制剂成分 ，可以有效抑制蛋白的降解，并维 持原有的蛋白间相互作用。 产品组成 ： 编号 PS0009 Storage 名称 Western 及 IP 细胞裂解液 100ml -20℃ 使用说明书 1 份 自备材料 ： 1、低温离心机 2、 PMSF 操作步骤(仅供参考) ： (一)贴壁培养细胞 1、取 Western 及 IP 细胞裂解液置于室温溶解混匀 ，使用前取适量裂解液加入PMSF，使 其最终浓度为 1mM。 2、去除贴壁细胞的培养液 ，用 PBS、NS 或无血清培养液清洗1 次，低速离心 ，弃上清， 留取沉淀。 3、按照 6 孔板每孔加入含有 PMSF 的裂解液的比例 ，加入Western 及 IP 细胞裂解液。移 液器轻轻吹打 ，使裂解液和细胞充分接触。 4、 离心 (如果用冷冻离心机 4℃离心效果更佳)，取上清。 5、进行后续的 SDS、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。 (二)悬浮培养细胞 1、取 Western 及 IP 细胞裂解液置于室温溶解混匀 ，使用前取适当量裂解液加入PMSF， 使其最终浓度为 1mM。 北京雷根生物技术有限公司 2、低速离心悬浮细胞 ，弃上清，收集沉淀。 3、用手指轻弹细胞 ，使其松散。按照 6 孔板每孔细胞加入 1 含有 PMSF 的裂解液的比例 ， 加入 Western 及 IP 细胞裂解液。通常 6 孔板每孔细胞加入 100μl 裂解液已经足够 ，但 如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到 ，再用手指轻弹以充分裂解细胞。充 分裂解后应没有明显的细胞沉淀。 4、 4℃离心 (如无低温离心机 ，室温下离心亦可)，取上清。 5、进行后续的 PAGE、Western、免疫沉淀等操作。 (三)组织样本 1、取 Western 及 IP 细胞裂解液置于室温溶解混匀 ，使用前取适当量裂解液加入PMSF， 使其最终浓度为 1mM。 2、把组织剪切成细小的碎片 ，越小越好。 3、取在液氮或超低温冰箱中冷冻以上的组织 ，迅速用液氮研磨，研磨过程尽量控制在1～ 2min 之内 ，以减少蛋白的降解。 4、 按照每 20mg 组织加入 100～200μl 裂解液的比例 ，加入含有PMSF 的裂解液。冰上 或 4℃裂解。 5、步骤 3、4 亦可以采用如下过程 ：按照每20mg 组织加入 100～200μl 裂解液的比例加 入含有 PMSF 的 Western 及 IP 细胞裂解液。 6、按照每 20mg 组织加入 100～200μl 裂解液的比例 ，加入含有PMSF 的裂解液。 7、4℃离心 (如无低温离心机 ，室温下离心亦可)，取上清。 8、进行后续的 PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。 注意事项 ： 1、在贴壁培养细胞的操作步骤中 ，去除贴壁细胞的培养液后，如果血清中的蛋白没有干扰， 可以不用清洗。 2、如果裂解不充分可以适当增加裂解液的用量 ，